GB/T 31804-2015 苹果锈果类病毒检疫鉴定方法

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T31804—2015

苹果锈果类病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofApplescarskinviroid

2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T31804—2015

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

。。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中国检验检疫科学研究院中华人民共和国珠海出入境检验检疫局中华人民共

:、、

和国厦门出入境检验检疫局中国农业科学院植物保护研究所中华人民共和国北京出入境检验检疫

、、

局青岛市农业科学研究院中华人民共和国山东出入境检验检疫局

、、。

本标准主要起草人张永江廖力廖富荣辛言言邓丛良李世访马荣群李明福李桂芬魏梅生

:、、、、、、、、、、

张成标吴兴海

、。

Ⅰ

GB/T31804—2015

苹果锈果类病毒检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了基于寄主植物症状及基因组特征的苹果锈果类病毒检疫鉴定方法

。

本标准适用于可能带有苹果锈果类病毒的植物材料的检测鉴定

。

2仪器设备用具及试剂

、

21仪器设备

.

电子分析天平垂直电泳槽小型离心机台式冷冻离心机普通仪实时荧光

(0.001g)、、、、PCR、PCR

仪电泳系统计凝胶成像系统冰箱超净工作台超低温冰箱高压灭菌锅制冰机

、、pH、、4℃、、-80℃、、、

涡旋振荡器微波炉等

、。

22用具

.

可调移液器吸头离心管及研

(2.5μL,10μL,20μL,100μL,1000μL)、、(0.2mL,0.5mL,1.5mL)

钵等

。

23试剂

.

除有特殊说明外所有试验用试剂均为分析纯或生化试剂

,。

试剂见附录试剂见附录实时荧光试剂见附录

RB;RT-PCRC;RT-PCRD。

3检测方法

31R测定

.

测定见附录

RB。

32RT-PCR检测

.

检测见附录

RT-PCRC。

33实时荧光RT-PCR检测

.

实时荧光检测见附录

RT-PCRD。

4结果判定

样品经第章中任意两种不同原理的方法检测为阳性即可判定样品带有

3,ASSVd。

1

GB/T31804—2015

5样品保存与结果记录

51样品保存

.

结果判定为阳性的样品应妥善保存并作好登记和标记以备复核用保存期满后需经灭活处理

,,。,。

52结果记录

.

完整的试验记录要包括样品的来源种类时间试验检测时间地点方法和结果并有试验人员

:、、,,、,

的签字测定应有银染色结果图片检测应有电泳结果图片实时荧光检测

;R,RT-PCR,RT-PCR

应有扩增曲线结果图片

。

2

GB/T31804—2015

附录A

资料性附录

()

苹果锈果类病毒相关资料

A1背景资料

.

A11苹果锈果类病毒基本信息

..

中文名称苹果锈果类病毒

:。

学名Alescarskinviroid

:pp。

缩写

:ASSVd。

异名苹果斑纹类病毒梨锈皮类病毒

:(Dappleappleviroid)、(Pearrustyskinviroid)、Japanesepear

和

fruitdimpleviroid、Applesabi-kavirusManshuringosabi-kabyo。

分类地位马铃薯纺锤块茎类病毒科Posiviroidae苹果锈果类病毒属Ascaviroid

:(p),(p)。

传播途径可通过嫁接病健根系自然接触及带毒繁殖材料传播

:、。

A12方法原理

..

根据在寄主植物上的症状进行初步判定根据自然状态和变性后的不同结构分子在

ASSVd;RNA

聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移率的差异进行往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳

(return-polyacrylamidegel

检测根据其核酸序列的特异性进行常规或实时荧光检测通过

electrophoresis,R);PCRPCR,

电泳条带大小或扩增曲线的变化进行结果判定

。

A2寄主范围

.

仅限于蔷薇科的苹果属Malus和梨属Pyrus植物

(Rosaceae)()()。

很多苹果栽培品种能用作该类病毒的繁殖寄主

。

A3地理分布

.

世界美国印度日本加拿大英国意大利阿根廷及波兰等国家和地区

:、、、