GB/T 35900.3-2018 动物流感检测 第3部分：H1和H3亚型流感病毒核酸双重荧光RT-PCR检测方法

ICS11.220

B41

国；

=11:.

中华人民和国国家标准

GB/T35900.3-2018

动物流感检测

第3部分：Hl和H3亚型流感病毒核酸

双重荧光RT-PCR检测方法

Animalinfluenzadetection-Part3:Methodofduplexreal-timeRT-PCRfor

thedetectionofH1andH3subtypeinfluenzavirus

2018-02-06发布2018-09-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T35900.3-2018

目u昌

GB/T35900《动物流感检测》目前分为3个部分：

一一第1部分：Hl亚型流感病毒核酸荧光RT-PCR检测方法；

第2部分：H3亚型流感病毒核酸荧光RT-PCR检测方法；

第3部分：Hl和H3亚型流感病毒核酸双重荧光RT-PCR检测方法。

本部分为GB/T35900的第3部分。

本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本部分由中华人民共和同农业部提出。

本部分向全同动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归仁｜。

本部分起草单位：中华人民共和同北京出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：蒲静、高志强、科强、刘环、吴丹、乔彩霞、张伟、张鹤晓、张利峰。

I

GB/T35900.3-2018

表B.2（续）

l个检测体系的力｜｜人茧

组

分

H3下游习｜物(10µmol/L)2.0µL

H3MGB短探针Cloµmol/U1.5µL

MMLV反转录酶（200U/µL)l.OµL

RNA酶梢Iii训剂（40U/µL)0.5µL

Tα’J酶＂（5U/µL)。.5µL

DEPC7](11.0µL

05×RT缓冲浓的组成为：375mmol/LKC！、15mmol/LMgC!i、50mrnol/LDTT、250mmol/LTrisHCl(pH8.3,

25℃〉。

"Tw1酶：具有5’→3＇外叨活性。

B.3注意事项

在检测过程中，应严防不同样品间的交叉污染。

反应液分装时应避免产生气泡，上机前检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。

8

GB/T35900.3-2018

附录C

（资料性附录）

典型扩增曲线示意图

Hl和H3亚型流感病毒核酸双重荧光RT-PCR检测方法阳性和阴性典型扩增曲线见罔C.L

,_...,

~

、

」每－

4.氢：c11＋』『.「.r:.’’-,,,

.m'\Jlilt

......,

:1.εIOOI什.

·阳’

..IIl钉呗阳性

IT:丁r

’

•』．」..

:t.~川I•Ii一二甲；二E二二

－』』－－』--

4

….

~2.~；01川I人），flt~

4:

品走

-~-tf11.川，m阳”

-主E

~冠－VOilI•..

·-三：：..二•-