HY/T 228-2018 藻类脂肪酸的测定 气相色谱法

ICS07.060;13.060.01

z17HY

中华人民共和国海洋行业标准

HY/T228-2018

藻类脂肪酸的测定气相色谱法

Determinationoffattyacidsinalgae-gaschromatography

2018-02-13发布2018-05-01实施

国家海洋局发布

中华人民共和国海洋

行业标准

藻类脂肪酸的测定气相色谱法

HY/T228-2018

’峰

中国标准出版社出版发行

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2019年1月第一版

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」

HY/T228-2018

目。昌

本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。

本标准由国家海洋局提出。

本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口。

本标准起草单位：国家海洋局第一海洋研究所、中国科学院海洋研究所、中国海洋大学。

本标准主要起草人：杨侣娟、李倩、郑明刚、郑立、韩笑天、刘涛、朱明壮、陈发荣。

I

HY/T228-2018

藻类脂肪酸的测定气相色谱法

范围

本标准规定了藻类中脂肪酸的气相色谱测定方法。

本标准适用于藻类中脂肪酸的测定。其他藻类中脂肪酸的测定可参考使用。

2规范性引用文件

3

口，用气相

藻类

色谱法测

4

4.1试剂

4.1.1

氢氧化

4.1.2盐酸CHCl

4.1.3氯化铀（NaCf

4.1.4

己烧（C,H~；~蜡

4.1.5甲醇CCH30H,_

4.1.6无水硫酸铀（Na2S04):400

4.2试剂配制

4.2.1饱和氢氧化伺甲醇溶液：称取40g氢氧化饵溶解在100mL甲醇中，搅拌溶解，澄清备用，室温

下可放置2个月。

4.2.2盐酸甲醇溶液(1mol/L)：量取10mL盐酸溶解在110mL甲醇中，混匀，室温下可放置2个月。

4.2.3饱和氯化铀溶液：称取360g氯化铀溶解在lL蒸馆水中，搅拌溶解，澄清备用，室温下可放置2

个月。

4.3标准晶

4.3.1十一碳酸甘油三醋，纯度大于99%。

4.3.2十一碳酸甲醋标准品，纯度大于99%。

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4.3.3混合脂肪酸甲醋标准品。

4.3.4单个脂肪酸甲醋标准品（可根据需求购买），纯度大于99%。

4.4溶液的配制

4.4.1十一碳酸甘油三醋内标溶液（0.15mg/mL）：准确称取15mg十一碳酸甘油三醋（4.3.1）至

100mL容量瓶中，用甲醇定容，冰箱4℃避光冷藏保存，有效期1个月。

4.4.2单个脂肪酸甲醋标准溶液(1mg/mL）：准确称取100mg脂肪酸甲醋标准物质（4.3.4）于100mL

容量瓶中，用正己烧定容，贮存于一20℃冰箱，有效期3个月。

4.4.3混合脂肪酸甲醋标准溶液(10µg/mL)：取出适量脂肪酸甲醋混合标准溶液（4.3.3）移至10mL

容量瓶中，用正己烧定容，配制成脂肪酸甲醋标准物质浓度为10µg/mL溶液。贮存于一20℃冰箱，有

效期3个月。

5仪器和设备

5.1气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。

5.2电热恒温水浴锅：控温范围25℃～ioo·c，控温精度±1℃。

5.3电子天平：感量0.1mg。

5.4粉碎机。

5.5具塞离心管。

5.6容量瓶。

5.7研钵。

6分析步骤

6.1藻粉的制备

藻类经冷冻干燥24h。干燥后大型藻经过粉碎机（4.4）粉碎过80目筛，微藻直接进行6.2。

6.2皂化

用天平称取藻粉约20mg，放入研钵（5.7）中，准确加入0.2mL十一碳酸甘油三醋内标溶液

(4.4.1），加入液氮反复研磨2次～3次，每次5min，用6.0mL饱和氢氧化饵甲醇溶液（4.2.1)分2次～

3次将研磨后的藻粉转移至具塞离心管（5.5）中，混匀。将离心管放入60℃水浴锅内加热处理60min,

每隔10min取出振荡5s~10s，处理结束后取出离心管冷却至室温。

6.3甲基化

皂化后的试样加入4mL1mol/L盐酸甲醇溶液（4.2.2），混匀，将离心管放入60℃水浴锅内加热

处理20min，每隔10min取出振荡5s~105，处理结束后取出离心管冷却至室温。

6.4萃取

甲基化后的试样准确加入1mL正己烧，加入3mL饱和氯化纳溶液（4.2.3），将管盖拧紧，涡旋振

荡2min，静置3min~5min待溶液分层后，取大约0.5mL上层正己烧，用无水硫酸铀脱水后进行气相

色谱分析。

2

」

HY/T228-2018

7样品的测定

7.1仪器测试条件

取单个脂肪酸甲醋标准溶液和脂肪酸甲醋混合标准溶液分别注入气相色谱仪，对色谱峰进行定性。

脂肪酸甲醋混合标准溶液气相色谱图，参见附录A。

色谱分析条件为：

一一色谱柱：毛细管色谱柱涂层为键合／交联聚乙醇，涂层厚度为0.25µm，内径为0.25mm，长度

为30m。

一－载气：高纯氮气（99.999%),1.5mL/min;

一一－氢气：高纯（99.999%),30mL/min;

一一空气：高纯（99.999%),300mL/min;

一一尾吹：高纯氮气（99.999%),35mL/min;

一一－检测器温度：300℃；

一一－进样口温度：250℃；

一一进样量：1µL;

一一进样方式：无分流进样；

一一一升温程序：初温50℃，保持5min,25℃／min升到180℃，1"C/min升到190℃，保持

10min,1℃／min升到205℃，保持10min,20℃／min升到240℃，保持5min。

7.2样品测定

上述色谱条件下将混合脂肪酸甲醋标准溶液和样品提取液分别注入气相色谱仪，以色谱峰峰面积

定量。

8结果计算

8.1单个脂肪酸甲醋含量

根据被测物和内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比，由校正因子按式(1）计算单个脂肪酸甲

醋的含量：

x,_w,×F,;×A;×1.0067…….(1)

A,×w

式中：

X;一一－藻类中脂肪酸甲醋t组分的含量，单位为毫克／克（mg/g);

w－一一藻类的质量，单位为毫克（mg);

w.样品中加入内标物的质量，单位为微克（µg);

儿一一内标物的峰面积；

人一一藻类中脂肪酸甲醋t组分的峰面积；

F,;一一相对校正因子。

1.0067一一十一碳酸甘油三酣转化成十一碳酸甲醋的转换系数。

其中，凡，按式（2）进行计算：

F,;巴马全：...(2)

-

;-w.'×A/

3

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式中：

W,'标准品脂肪酸z组分的质量，单位为微克（µg);

w.＇←→标准品中内标物