DB12/T 987-2020 鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.020.30

B41

DB12

天津市地方标准

DB12/T987—2020

鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素

类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱

法

Determinationofresiduesofsulfonamides,quinolonesandtetracyclinesinfreshand

frozenmeatoflivestockandpoultrybyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

2020-10-14发布2020-11-15实施

天津市市场监督管理委员会发布

DB12/T987—2020

前言

本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。

本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、摩天众创（天津）检测服务有限公司。

本标准主要起草人：李娜、林宏芳、邵辉、李辉、刘磊、张玉婷、郭永泽、绳慧珊、卢娜、冯兆欣、

郝玉杰、潘喆。

I

DB12/T987—2020

鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定液

相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定-液相色谱-串联质谱

法的方法提要、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定步骤、灵敏度、准确度和精密度。

本标准适用于鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类共28种兽药残留的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3方法提要

试样经酸化乙腈提取，提取液浓缩、甲醇定容后，用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）测定，基

质外标法定量。

4试剂和材料

4.1基本要求

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。所用水为GB/T6682规定的一级水。

4.2试剂

4.2.1乙腈：色谱纯。

4.2.2甲醇：色谱纯。

4.2.3甲酸：色谱纯。

4.2.4乙酸：色谱纯。

4.2.5正己烷。

4.2.6无水硫酸钠。

4.2.7乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA•2H2O）。

4.2.8柠檬酸（C6H8O7•H2O）。

4.2.9磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）

4.2.10氢氧化钠（NaOH）。

4.3溶液配制

1

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4.3.1氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。

4.3.2氢氧化钠溶液（0.03mol/L）：称取0.12g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。

4.3.3Na2EDTA-McIlvaine缓冲溶液（0.1mol/L）：称取12.9g柠檬酸，10.9g磷酸氢二钠，37.2g

乙二胺四乙酸二钠，加900mL水溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至4.0，加水定容至1000mL。

4.3.40.1%甲酸水：移取0.1mL甲酸加入100mL水中，混匀。

4.3.50.1%甲酸甲醇：移取0.1mL甲酸加入100mL甲醇中，混匀。

4.3.6甲醇-0.1%甲酸（10:90，V:V）：移取10mL甲醇加入90mL0.1%甲酸水溶液中，混匀。

4.4标准品

磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺

胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁

啉、麻保沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、二氟沙星、噁喹酸、氟甲喹、土霉素、金霉素、强力

霉素标准品：纯度≥98.0%；环丙沙星纯度≥95.0%，(达氟)单诺沙星纯度≥94.0%，沙拉沙星纯度≥95.0%，

四环素纯度≥96.5%。

4.5标准溶液配制

4.5.1标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取10mg各兽药标准品，根据标准品的溶解性不同，磺胺

类、四环素类兽药用乙腈溶解并定容至10mL，喹诺酮类兽药先用2mL氢氧化钠溶液溶解，甲醇定容

至10mL，于-18℃避光保存，有效期1年。

4.5.2标准工作溶液：分别吸取28种兽药标准储备液0.25mL于25mL容量瓶，用乙腈稀释并定容，

配制成浓度为10mg/L的混合标准工作液，于4℃避光保存，有效期1个月。

4.6材料

4.6.1十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40~60μm。

4.6.2氨基硅烷化硅胶（NH2）：40~60μm。

4.6.3微孔滤膜（有机相）：0.22μm。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

5.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。

5.3台式高速离心机：转速不低于4000r/min。

5.4匀浆机。

5.5涡旋混合器。

5.6氮吹仪。

5.7纯水仪。

6试样制备与保存

6.1试样制备

鲜、冻畜禽肉类样品剔去毛、淤血、骨等，取缩分后样品，用匀浆机捣碎成肉糜状，混匀，装入清

洁容器内，密封并标识。用冷冻畜禽肉类样品在室温下自然解冻至稍微变软，且冻水未流出待制备。

2

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6.2试样保存

试样应在-18℃条件下保存。

7测定步骤

7.1样品前处理

准确称取试样2.00g（精确至0.02g）于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入2mL0.1mol/L

Na2EDTA-McIlvaine缓冲溶液，3mL乙腈，涡旋2min，4000r/min离心5min，收集上清液于另一50mL

离心管中，残渣加5mL乙腈，涡旋2min，4000r/min离心5min，合并上清液于上述50mL离心管中。

于上清液中依次加入200µL乙酸，1g氯化钠，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上层乙腈相2mL

于10mL聚丙烯塑料离心管中，加入C18和NH2吸附剂各100mg，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上

清液，氮气吹干。残渣用1mL甲醇-0.1%甲酸水（10:90，V:V）定容，过0.22µm有机滤膜。

7.2测定

7.2.1液相色谱条件如下：

——色谱柱：AcquityBEHRP18柱(2.1×100mm，1.7μm)；

——流动相：A相：0.1%甲酸甲醇；B相：0.1%甲酸水；梯度洗脱条件见表1。

——进样量：10μL；

——柱温：30℃。

表1梯度洗脱条件

a

时间(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)曲线

00.2595Initial

30.220806

70.240606

100.240606

110.290106

120.290106

140.25951

a表示线性变化，1表示立即变化。

7.2.2质谱条件如下：

——电离源：电喷雾正离子(ESI+)；

——毛细管电压：3.0kV；

——离子源温度：120℃；

——脱溶剂气温度：400℃；

——脱溶剂气流量：600L/h；

——锥孔反吹气流量：60L/h；

——检测方式：多反应监测（MRM）；

质谱采集参数附录A。

7.3定性

3

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液相色谱-串联质谱法对样品定性确证须满足以下要求：

——待测样品的保留时间在外标标准样品的保留时间的±2.5%之内；

——定性离子的信噪比大于3（S/N>3）；

——与外标标准品相比，样品的两个特征离子相对丰度在表2规定的许可范围内。

28种兽药的多反应监测（MRM）色谱图参见附录B。

表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度比（%）允许的最大偏差（%）

＞50±20

＞20～50±25

＞10～20±30

≤10±50

7.4定量

采用外标法定量。用色谱数据处理软件或按公式（1）计算试样中的目标物含量（µg/kg）：

AV3V1

s..................................(1)

AsV2m

式中：

ω——试样中目标物的含量，单位为微克每千克（µg/kg）；

ρs目标物标准工作溶液的浓度，单位为微克每升（µg/L）；

A试样测定液中目标物定量离子的峰面积；

As标准工作溶液中目标物定量离子的峰面积；

V1提取溶液中乙腈的总体积（mL）；

V2吸取用来净化的提取溶液的体积（mL）

V3最终定容体积（mL）；

V试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m试样溶液所代表试样的量，单位为克（g）；

注：计算结果保留两位有效数字，当结果大于1µg/kg时保留三位有效数字。

8灵敏度

28种兽药的检测限在0.5µg/kg～3.0µg/kg之间。磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、

磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺间甲

氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、麻保沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、单诺沙星、

环丙沙星、恩诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、噁喹酸、氟甲喹的定量限为5.0µg/kg，四环素、土霉素、

金霉素和强力霉素的定量限均为10.0µg/kg。

9准确度和精密度

9.1准确度

4

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9.1.1鲜、冻畜禽肉中磺胺类和喹诺酮类兽药在5µg/kg～50µg/kg添加水平，回收率在70%～110%

之间；

9.1.2鲜、冻畜禽肉中四环素类兽药在10µg/kg～50µg/kg添加水平，回收率在70%～110%之间。

9.2精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

5

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AA

附录A

（资料性附录）

28种兽药检测

表A.128种兽药中英文名称、保留时间、质谱检测条件和定量限

保留时间定性离子对定量离子对锥孔电压碰撞能量检测限定量限

名称

(min)(m/z)(m/z)(V)(V)(µg/kg)(µg/kg)

磺胺醋酰215/155.8;215/10

4.15215/155.81812;231.25.0

Sulfacetamide7.7

磺胺嘧啶251/155.8;251/10

4.52251/155.82518;281.35.0

Sulfadiazine7.7

磺胺吡啶250.2/155.8;250.250.2/155.

4.872515;161.05.0

Sulfapyridine2/1848

磺胺噻唑256.2/107.8;256.256.2/107.

4.992014;211.55.0

sulfathiazole2/155.88

磺胺甲基嘧啶265/155.8;265/17

5.38265/171.82520;160.55.0

Sulfamerazine1.8

麻保沙星363.1/320.1;363.363.1/320.

5.383020;231.25.0

Marbofloxacin1/3451

四环素

5.94445/428;445/410445/4102519;252.810

Tetracycline

氧氟沙星362/318.2;362/26

6.03362/261.13024;310.55.0

Ofloxacin1.1

磺胺二甲基嘧啶

6.17279/186;279/124279/1863016;200.55.0

Sulfamethazine

土霉素

6.1