DB15/T 2022-2020 牛和马源性成分同步检测方法 实时荧光PCR法

ICS07.080

CCSA40

DB15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2022—2020

牛和马源性成分同步检测方法

实时荧光PCR法

Real-timePCRMethodforAuthentificationofCattleandHorseDerivedMaterials

2020-10-20发布2020-11-20实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2022—2020

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由锡林郭勒职业学院、锡林郭勒食品药品检验检测和风险评估中心提出。

本文件由内蒙古自治区肉乳标准化技术委员会（SAM/TC39）归口。

本文件起草单位：锡林郭勒职业学院、锡林郭勒食品药品检验检测和风险评估中心。

本文件主要起草人：郭梁、罗建兴、徐伟良、其勒木格、郭元晟、李春冬、刘国强。

I

DB15/T2022—2020

牛和马源性成分同步检测方法实时荧光PCR法

1范围

本文件描述了动物产品（肉、乳）中牛和马源性成分的实时荧光PCR检测方法。

本文件适用于鲜肉、鲜乳、加工肉制品、加工乳制品中牛和马源性成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用

文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

实时荧光PCRrealtimePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时检测整个PCR过程，对未知模板进行

定性或定量分析。

3.2

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

3.3

阳性对照positivecontrol

用已知含有牛和马源性成分的样品作阳性对照。

3.4

阴性对照negativecontrol

用已知不含有牛和马源性成分的样品作阴性对照。

1

DB15/T2022—2020

3.5

空白对照blankcontrol

用等体积的灭菌水代替模板DNA作空白对照。

4原理

利用不同荧光基团标记特异性牛和马探针以及质控探针，采用多重实时荧光PCR技术，对提取于

鲜肉、鲜乳、加工肉制品、加工乳制品的DNA进行扩增。在同一反应中对牛和马特异基因以及质控基

因同时扩增，三种荧光同时检测。其中，同管质控探针的检测旨在监控扩增反应是否正常进行，避

免假阴性结果。通过评价Ct值判断动物产品（肉、乳）是否含有牛和马源性成分。

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯。实验用水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1三氯甲烷。

5.2异戊醇。

5.3异丙醇。

5.495%乙醇。

5.575%乙醇。

5.6CTAB提取液：称取10gCTAB（十六烷基三甲基溴化铵）、40.6gNaCl、6.06gTrisbase

（三羟甲基氨基甲烷）、3.94gNa2EDTA（乙二胺四乙