DB22/T 2988-2019 白灵菇和杏鲍菇菌种真实性鉴定 ITS-RFLP法

ICS65.020.20

B05

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2988—2019

白灵菇和杏鲍菇菌种真实性鉴定ITS-RFLP

法

VerificationofgenuinenessforPleurotustuoliensisandPleurotuseryngii

strain—ITS-RFLP

2019-05-27发布2019-06-17实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T2988—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省农业农村厅提出并归口。

本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：温嘉伟、杨云贵、张维东、谭笑、黄枭、刘迎春、杨大海、滕星、姚丽影、谢

江波。

I

DB22/T2988—2019

白灵菇和杏鲍菇菌种真实性鉴定ITS-RFLP法

1范围

本标准规定了白灵菇和杏鲍菇菌种真实性鉴定ITS-RFLP法的原理、试验条件、试剂、设备仪器、样

品、试验步骤、试验数据处理、试验报告。

本标准适用于白灵菇和杏鲍菇菌种（母种、原种和栽培种）真实性检测和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T8979-2008纯氮、高纯氮和超纯氮

NY/T1730-2009食用菌菌种真实性鉴定ISSR法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

ITS-RFLPinternaltranscribedspacer–restrictionfragmentlengthpolymorphism

内转录间隔区-限制性片段长度多态性。

3.2

白灵菇Pleurotuseryngiivar.tuoliensisC.J.Mou

侧耳属，刺芹侧耳变种或亚种，子实体通体白色。（GB/T-12728）

3.3

杏鲍菇Pleurotuseryngii

又名刺芹侧耳，菌柄白色，菌盖灰褐色。

3.4

PCR扩增polymerasechainreaction

聚合酶链式反应。

4原理

利用真菌内转录区域保守的引物ITS1和ITS4，扩增真菌内转录区域，然后对PCR产物进行酶切，

根据酶切片段大小对白灵菇和杏鲍菇菌种真实性进行鉴定。

5试验条件

1

DB22/T2988—2019

DNA提取、PCR反应体系配制、PCR扩增、电泳等功能区域应采取分区操作，避免交叉感染。

6试剂与材料

除非另有说明，在分析中仅适用分析纯试剂和去离子水或相当纯度的水。

6.1超纯水（ddH2O）：符合GB/T6682规定的二级水，密封、4℃保存。

6.210mol/L氢氧化钠溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠（NaOH），溶解后，冷却至室温，

再加水定容至200mL。

6.3500mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（pH8.0）：称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，

加入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液（见6.4）直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液（见6.4）

调pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

6.41mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCL）溶液（pH8.0）：称取121.1g三羟甲基氨基甲

烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下

灭菌20min。

6.51.5mol/L氯化钠（NaCL）溶液：在160mL水中加入17.6g氯化钠，溶解后，冷却至室温，

再加水定容至200mL。

6.6三氯甲烷（CHCL3）：避光、密封、4℃保存。；

6.7异戊醇（C5H12O）：避光、密封、4℃保存。

6.8乙醇(C2H6O)：密封、