DB37/T 4049-2020 种鸡鸡毒支原体和滑液囊支原体病净化技术规范

ICS65.060.25

B10/14

DB37

山东省地方标准

DB37/T4049—2020

种鸡鸡毒支原体和滑液囊支原体病净化技

术规范

Technicalcriterionforeradicationofmycoplasmagallisepticumandmycoplasma

synoviaeinbreederflock

2020-07-09发布2020-08-09实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T4049—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院家禽研究所、山东省健牧生物药业有限公司、五莲县畜牧兽医

管理服务中心。

本标准主要起草人：徐怀英、秦卓明、黄迪海、徐宁、亓丽红、井庆川、杨金兴、高月花、曹顶国、

宋玲玲、刘涛。

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DB37/T4049—2020

种鸡鸡毒支原体和滑液囊支原体病净化技术规范

1范围

本标准规定了种鸡群鸡毒支原体和滑液囊支原体病净化技术规范。

本标准适用于曾祖代、祖代及非免疫父母代种鸡群鸡毒支原体和滑液囊支原体病的净化。本标准不

适用于疫苗免疫鸡场。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T17999.4SPF鸡微生物学监测第4部分：SPF鸡血清平板凝集试验

NY/T553禽支原体PCR检测方法

NY/T1168畜禽粪便无害化处理技术规范

NY/T5030无公害农产品兽药使用准则

DB34/T2160鸡毒支原体感染防治技术

DB63/T1652病害动物及病害动物产品无害化处理技术规程

T/CVMA1禽白血病净化技术规范

世界动物卫生组织（OIE）陆生动物诊断试验和疫苗标准手册

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

种鸡breedingchicken

按照动物育种四系配套的原则，将鸡的遗传谱系分为曾祖代、祖代、父母代和商品代，只有曾祖代

的鸡（原种鸡）可以自繁、自养和留种，而其他后代均必须按照四系配套的原则进行育种，且不能留做

和它同级的种。种鸡（祖代和父母代）是经过不断地选种和选育，具有一定的生产、生长和遗传稳定性，

能够提供子代，且按照育种组织制订的标准验收和鉴定并承认的鸡品种。按经济用途分为蛋用型、肉用

型、肉蛋兼用型和观赏型。

3.2

家禽疫病净化poultrydiseaseeradication

在一个养禽场或指定的养殖区域内，通过持续不断的检测和监测，及时发现和淘汰患病禽群或带菌

禽群，并通过及时淘汰感染禽群的方法，以实现根除某种家禽疾病的过程。

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DB37/T4049—2020

4诊断

4.1临床诊断

4.1.1鸡毒支原体病

参照DB34/T2160的临床症状和病理变化。

4.1.2滑液囊支原体病

4.1.2.1流行特点

感染通常见于4周～16周龄的鸡。鸡群的患病率一般为5%～10%，病死率不超过10%。

4.1.2.2临床症状

引起的呼吸道症状不明显，受侵害部位在关节的滑液囊膜及腱鞘。出现关节肿胀、热痛、胸部龙骨

上水疱、跛行甚至站不起来，从而造成雏鸡或青年鸡生长发育受阻，产蛋鸡生产性能下降，蛋壳质量变

差、易碎。

最初症状是鸡冠苍白、生长迟缓和关节肿胀，跗关节和爪垫是主要感染部位。随着病情的发展，出

现鸡冠萎缩、羽毛粗乱、跛行甚至站立不起。呼吸系统感染滑液囊支原体症状轻微，但感染禽是带菌者。

成年鸡群感染多表现为蛋壳质量变差、易碎。

4.1.2.3病理变化

病禽主要表现为滑膜炎。在病情较轻时，在肿胀的关节部位可见到有多量黏稠的渗出液。严重时，

可见到腱鞘处有黄白色囊状物，内有白色黏液，关节滑液囊或脚垫内有黏液性呈灰白色的乳酪样渗出物，

有时关节软骨出现糜烂。趾关节和跗关节可见有异嗜性白细胞和纤维素浸润。

4.2病原分离培养

对可疑鸡群进行支原体病原的分离培养，培养基配制、分离部位及培养条件等参照世界动物卫生组

织（OIE）陆生动物诊断试验和疫苗标准手册相关内容进行。

4.3血清学检测

对种鸡群鸡毒支原体和滑液囊支原体凝集抗体的检测，参照GB/T17999.4进行，在2min内出现凝

集者为阳性；2min内不凝集者为阴性；介于上述两者之间为可疑，进行复核试验，如仍为可疑，判为

阳性（见附录B）。

4.4核酸检测

聚合酶链式反应（PCR）和环介导等温扩增技术（LAMP）方法可任选其一。

4.4.1试剂

除非另有说明，仅使用分析纯试剂。

4.4.1.1实验室用水应符合GB/T6682的要求。

4.4.1.22×TaqPCRMasterMixⅡ。

4.4.1.310×LAMPAmplificationBuffer，-20℃保存。

4.4.1.410mmol/LBetaine溶液：配制见附录A.1，-20℃保存。

2

DB37/T4049—2020

4.4.1.5BstDNAPolymerase（6U/μL），-20℃保存，避免反复冻融。

4.4.1.6MgSO4(100mmol/L)：配制见附录A.2，-20℃保存。

4.4.1.7dNTP混合液(10mmol/L)，-20℃保存，避免反复冻融。

4.4.1.8SYBRGreenⅠ核酸染料，4℃保存。

4.4.1.9DNAMarker2000，-20℃保存，避免反复冻融。开盖后于4℃保存不超过3个月。

4.4.1.10细菌基因组DNA提取试剂盒，4℃保存。

4.4.1.11标准菌株，采用的MG标准菌株为F-36株，采用的MS标准菌株为GX11-T株。

4.4.2仪器设备

4.4.2.1PCR扩增仪。

4.4.2.2台式高速冷冻离心机：转速≥12000r/min。

4.4.2.3微量移液器：2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL。

4.4.2.4电子天平：精度0.01mg。

4.4.2.5恒温水浴锅或恒温金属浴。

4.4.2.6涡旋仪。

4.4.2.7生物安全柜。

4.4.2.8电泳仪。

4.4.2.9紫外透射反射分析仪。

4.4.3样品处理

取咽喉棉拭子。将棉拭子样品悬浮于1mLPBS溶液中，混匀成悬浮液。

4.4.4DNA提取

将棉拭子样品制成的混悬液4000r/min离心5min，将离心后的上清置于新的1.5mL离心管中，在

4℃条件下，12000g离心20min，弃去上清液，并将沉淀物重新悬浮在25μL～50μL的0.1%焦碳

酸二乙酯(DEP)水中。按细菌基因组DNA提取试剂盒说明书，提取DNA。

4.4.5聚合酶链式反应（PCR）方法

鸡毒支原体和滑液囊支原体的PCR检测方法使用的引物及反应条件等参考NY/T553。

4.4.6环介导等温扩增技术（LAMP）方法

4.4.6.1引物

依据鸡毒支原体（MG）的mgc2基因序列和滑液囊支原体（MS）的16SrRNA序列，分别设计LAMP引物，

扩增长度约200bp。

MG-F3：5’-ACACTTGTTTTACATGAAGGT-3’

MG-B3：5