T/LNSI 008-2024 人脐带间充质干细胞

ICS11.020

CCSC05

团体标准

T/LNSI008-2024

人脐带间充质干细胞

Humanumbilicalcordmesenchymalstemcells

2024-08-15发布2024-08-15实施

辽宁省免疫学会发布

T/LNSI008-2024

目次

前言...............................................................................III

1范围................................................................................1

2规范性引用文件......................................................................1

3术语和定义..........................................................................1

4符号和缩略语........................................................................2

6检验方法............................................................................5

7检验规则............................................................................6

9标签................................................................................8

10包装、储存及运输...................................................................8

11废弃物处理.........................................................................9

附录A（规范性）细胞存活率检测细胞计数法..............................................10

附录B（规范性）细胞标志蛋白检测流式细胞法............................................12

附录C（规范性）成骨分化检测茜素红S染色法............................................14

附录D（规范性）成脂分化检测油红O染色法..............................................16

附录E（规范性）成软骨分化检测阿尔新蓝染色法..........................................18

附录F（规范性）成瘤性检测免疫缺陷小鼠检测法..........................................20

附录G（规范性）干细胞对淋巴细胞增殖抑制检测干细胞共培养法............................22

I

T/LNSI008-2024

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化的文件结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由沈阳艾米奥生物工程技术研发中心有限公司、沈阳市再生生物医学重点实验室提出。

本文件由辽宁省免疫学会归口。

本文件起草单位：沈阳艾米奥生物工程技术研发中心有限公司、中国医科大学干细胞与再生医学研

究室、沈阳干细胞与再生医学重点实验室、辽宁艾米奥干细胞与再生医学研究院、辽宁省细胞生物学学

会、辽宁省生物技术协会、沈阳市干细胞与再生医学产业技术创新联盟、沈阳药科大学、中国医科大学

附属第一医院、中国医科大学附属口腔医院、中国医科大学附属盛京医院、艾米奥国际干细胞医院。

本文件主要起草人：庞希宁、庞然、施萍、单风平、王莉莎、赫甡、宋扬、徐东芬、荆晶、姜雯宇、

高航、谢光麟、邵锡柱、王竟、孟涛、张美玲、聂宏光、郎宏鑫、刘晓玉、王喜良、张涛、赵峰、张殿

宝、王瑞、李彩虹、李宏图、潘长伟、孔娟、王哲、王蔚、殷军、郭然、张宁、李晓航。

III

T/LNSI008-2024

人脐带间充质干细胞

1范围

本文件规定了人脐带间充质干细胞的技术要求、检验方法、检验规则、使用说明、标签、包装、储

存、运输和废弃物处理要求。

本文件适用于人脐带间充质干细胞的生产和检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

WS213丙型肝炎诊断

WS273梅毒诊断

WS293-2019《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》

T/CSCB0001-2022《人干细胞研究伦理审查技术规范》

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则

中华人民共和国药典（2020年版）

全国临床检验操作规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

间充质干细胞mesenchymalstemcells

1

T/LNSI008-2024

主要来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于全是多种组

织中，可在体外培养扩增，并在特定条件下分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。

3.2

人脐带间充质干细胞humanumbilicalcordmesenchymalstemcells

来源于人脐带华氏胶组织，贴壁培养后呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，可在体外自我更新并具有

成骨、成脂、成软骨等分化能力的间充质干细胞。

4符号和缩略语

下列符号和缩略语适用于本文件。

CD——分化簇（ClusterofDifferentiation）

DNA——脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

EBV——疱疹病毒（Epstein-BarVirus）

HBV——乙型病毒性肝炎（HepatitisBVirus）

HCMV——人巨细胞病毒（HumanCytomegalovirus）

HCV——丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV——人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

HLA-DR——人类白细胞抗原-DR（HumanLeukocyteAntigen-DR）

HTLV——人类嗜T细胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus）

IDO——吲哚胺2,3-双加氧酶（Indoleamine2,3-dioxygenase）

IFN-γ——干扰素-γ（Interferon-γ）

TNF-α——肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosisFactor-α）

PCR——聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

STR——短串联重复序列（ShortTandemRepeat）

TP——梅毒螺旋体（TreponemaPallidum）

5技术要求

2

T/LNSI008-2024

5.1原材料和辅料

5.1.1应符合T/CSCB0001-2022要求。

5.1.2应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细

胞的安全。

5.1.3供体应筛查HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV和TP，并记录结果。

5.2分离与培养方法

5.2.1分离及提取

采用组织块贴壁法从脐带华氏胶组织中分离培养脐带间充质干细胞。进行人脐带间充质干细胞原代

培养。

5.2.2人脐带间充质干细胞换液

根据细胞的生长情况换液。

5.2.3人脐带间充质干细胞传代

传代操作应密度适宜、及时、迅速。

5.2.4人脐带间充质干细胞冻存

冻存细胞程序降温后置液氮中保存。

5.2.5人脐带间充质干细胞复苏

取出冻存管进行快速融化，离心洗涤后进行培养。

5.2.6人脐带间充质干细胞溶液

人脐带间充质干细胞溶液为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。

5.3关键质量属性

5.3.1细胞形态

细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。

3

T/LNSI008-2024

5.3.2