YC/T 202-2006 烟草及烟草制品 多酚类化合物 绿原酸、莨菪亭和芸香苷的测定

ICS65.160

X87

备案号:17296-2006Y口

中华人民共和国烟草行业标准

YC/T202-2006

烟草及烟草制品多酚类化合物

绿原酸、菌著亭和芸香普的测定

Tobaccoandtobaccoproducts-Determinationofpolyphenols-

Chlorogenicacid,scopletinandrutin

2006-02-23发布2006-03-01实施

国家烟草专卖局发布

YC/T202-2006

oU吕

本标准的附录A、附录B为资料性附录。

本标准由国家烟草专卖局提出。

本标准由全国烟草标准化技术委员会(TC144)归口。

本标准起草单位:中国烟草总公司郑州烟草研究院、中国烟草标准化研究中心。

本标准主要起草人:谢复炜、李栋、王异、吴鸣

YC/T202-2006

烟草及烟草制品多酚类化合物

绿原酸、蓖著亭和芸香昔的测定

范围

本标准规定了烟草和烟草制品中三种多酚(绿原酸、蓑营亭和芸香普)的测定方法。

本标准适用于烟草和烟草制品。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新破本适用于本标准。

GB/T5606.1卷烟第I部分:抽样

GB/T19616烟草成批原料取样的一般原则(GB/T19616-2004,ISO4874:2000,MOD)

YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法

原理

用5。%甲醇水溶液萃取烟草和烟草制品中的多酚类化合物，萃取液经。.45Vm滤膜过滤后，通过

高效液相色谱(HPLC)定量分析检测其中三种多酚类化合物的含量。

4试荆

除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂，水应为蒸馏水或同等纯度的水去离子水(R>5Mn,

使用前经。.45rim滤膜过滤)

4.1去离子水(R>5Mn).

4.2甲醇:色谱纯。

4.3乙酸:分析纯

4.4绿原酸(纯度>97%),

4.5蓑若亭(纯度>97>)。

4.6芸香普(纯度>97环)。

4.7萃取溶液:制备I+l(体积分数)的甲醇(4.2)+水((4.1)溶液。

4.8多酚标准溶液

4.8.1一级标准溶液

在50mL烧杯中称量100mg左右绿原酸(4.4),5mg左右蓖若亭(4.5),100mg左右芸香普

(4.6)，准确至。.1mg，加人约30ml甲醇(4.2)完全溶解后，转移到100m工_的容量瓶中，加萃取溶液

(4.7)稀释至刻度(一级标准溶液贮存条件:4℃冰箱内可保存3个月)。

4.8.2二级标准溶液

将10ml一级标准溶液(4.7.1)移至100m工容量瓶中用萃取溶液(4.7)稀释至刻度

4.9多酚校准溶液:分别准确移取1ml,,2m工、5ml二级标准溶液(4.8.2),了mL,2mL,5ml一级

标准溶液(4.7.1)至100nil.容量瓶中用萃取溶液((4.7)稀释至刻度，此六个标准溶液以及二级标准溶

液(4.8.2)为系列标准校准溶液(多酚校准溶液应在使用前配制，不能长时间保存)。

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5仪器

常用实验仪器以及下述各项。

分析天平:感量。.1mg,

_:;高效液相色谱仪:具有柱温箱、梯度洗脱功能、紫外检测器和自动进样器(自动进样器为可选件)。

推荐色谱柱:250mmX4.6mm色谱柱，固定相C,。填料粒度5Km,

水相滤膜:。.45Km

:.:

超声波振荡器。

6分析步骤

6.1抽样

按GB/T5606.1和GB/丁19616抽取样品

6.2烟草样品制备

按YC/T31制备试样，测定水分含量

6.3测定次数

每个样品应平行测定两次。

6.4样品分析

6.4.1样品萃取

称取100mg左右样品，准确至0.1mg，置于50ml锥形瓶内，再准确加人20.0mL50%甲醇+水

溶液，置于超声波振荡器(5.4)超声(频率:4okHz)提取20min。取约2mL萃取液经0.45Wm的水相

滤膜过滤。

6.4.2高效液相色谱仪

按照仪器说明书对高效液相色谱仪进行操作。较适合的色谱条件如下:

流动相A:水+甲醇+乙酸=88+10+2(体积分数)

流动相B:水+甲醇+乙酸=10+88+2(体积分数)

柱温:300C

柱流量:1MI./min

进样体积:10川

梯度:。min:A:1000o

16.5min:A:80%,B:20%

30min:A:20%,B:80%

检测器:检测波长:340nm参比波长:480nm

分析时间约为40min.

典型烟草样品色谱图参见图A.2.

6.4.3测定

用高效液相色谱测定一系列多酚校准溶液(4.9)，得到三种多酚的积分峰面积，用峰面积作为纵坐

标，多酚浓度作为横坐标分别建立三种多酚的校正曲线。对校正数据进行线性回归(r>0.99)。然后

测定烟草萃取样品，从样品中多酚的峰面积计算每一个烟草萃取样品中三种多酚的浓度(mg/mL),

结果计算

以干基计的三种多酚的含量，按式(1)计算:

c义20

·..·.···。········……(1)

-X(1一w)

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式中:

P—每克试样的多酚含量，单位为毫克每克(mg/g);

c—萃取样品中多酚的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);

20—萃取溶液体积，单位为毫升(ML);

m—试样的质量，单位为克(9);

w—试样的水分百分含量

以两次测定的平均值作为测定结果，结果精确至0.01mg/g,

8精密度、回收率和检出限

本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果参见表B.

9测试报告

测试报告应包含采用的方法和得到的结果(mg/g)。应分别列出每种多酚的含量。报告还应包含

样品信息和本方法未规定的、或是选择性的操作条件，以及可能对结果产生影响的其他情况。

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附录A

(资料性附录)

色谱图示例

A.1多酚校准溶液(3-)色谱图，见图A.10

Nom70.

60

阳

40

加

02

01

0

7.51012.515175

1—一绿原酸;

2一食若亭;

3—芸香普。

图A.1多酚校准溶液(3#)色谱图

A.2典型烟草样品中多酚色谱图，见图A.2e

1绿原酸;

2--蓑若亭;

3—芸香普。

图A.2典型烟草样品中多酚色谱图

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附录B

(资料性附录)

本方法的精密度试验研究结果

本方法的精密度、回收率和检出限试验研究结果，见表B.10

表B.1本方法的精密度试验研究结果

低浓度中浓度高浓度

变异系数/检出限/

多酚加人量/回收率/加人量/回收率/加人量/回收率/

(%)(mg/g)

(mg/g)(%)(mg/g)(%)(mg/g)(%)

绿原酸0.50105.91.25100.72.5099.21.850.028

蓑若亭0.5094.1125104.92.50103.41.080.016

芸香普0.50108.，1.25103.32.50102.22.050.022

YC/T202-2006

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