DB15/T 2907-2023 溶血性曼氏杆菌病诊断技术规范

ICS11.220

CCSB41

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2907—2023

溶血性曼氏杆菌病诊断技术规范

Technicalspecificationforthediagnosisofmannheimiahaemolytica

2023-03-10发布2023-04-10实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2907—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古大学、内蒙古蒙微生物科技有限公司、金宇保灵生物药品有限公司。

本文件主要起草人：王炜、王岩、赵丽霞、韩四娥、孟凯、胡薇。

I

DB15/T2907—2023

溶血性曼氏杆菌病诊断技术规范

1范围

本文件规定了溶血性曼氏杆菌病的临床诊断、细菌分离与鉴定、PCR检测和间接ELISA抗体检测等诊

断技术要求。

本文件适用于牛、羊饲养场(户)和动物疫病检疫、诊疗单位对牛、羊临床样本和分离培养物中溶血

性曼氏杆菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14926.43-2001实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

Mh：溶血性曼氏杆菌（Mannheimiahaemolytica）

LKTA：白细胞毒素蛋白A（LeukotoxinA）

PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

bp：碱基对（Basepair）

dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxyribonucleosidetriphosphates）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

TSB：胰蛋白胨大豆肉汤（Trypticsoybroth）

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebuffersolution）

ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzymelinkedimmunosorbentassay）

5临床诊断

流行病学

由溶血性曼氏杆菌引起的牛、羊呼吸道疾病，一年四季均可发生，秋冬季多见。

1

DB15/T2907—2023

临床症状

发病牛、羊主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、流涕，并伴有体温升高40℃～42℃、精神沉郁、

厌食等。发病初期动物呼吸速率加快，继而出现严重的呼吸困难，呼吸伴有啰音。

病理变化

临床病理变化以纤维素性渗出性肺炎、大叶性肺炎和胸膜肺炎为主。病理剖检可见：病变肺呈肉样

变、质地坚实、肺水肿、间质增宽、胸腔脏层和壁层均有纤维素附着、胸腔积液呈黄色或红黄色、肺与

胸膜黏连，心包炎。

6样品采集

主要试剂耗材与器械

除另有规定外，所用试剂均为分析纯。试验用水均符合GB/T6682-2008二级水规定。

TSB培养基（配制方法见附录A.1）、0.01mol/LPBS溶液（配制方法见附录A.2）、75%酒精、无菌

采样袋、5mL冻存管、2mL冻存管、手术剪刀、镊子。

病料采集

6.2.1将棉签伸入鼻腔或咽部刮取分泌物，所有拭子采完后分别放入盛有3mLTSB培养基的5mL冻

存管中，编号，记录。采集的样品密封后，于2℃～8℃条件下保存并送到实验室。

6.2.2将发病牛、羊剖检后取肺和淋巴结组织，编号，记录。采集的样品密封后，于2℃～8℃条件

下保存并送到实验室。

6.2.3采用75%酒精对采血动物颈部静脉表面皮肤进行擦拭消毒，采集2mL～5mL血液，按常规方法

分离血清，编号，记录，于2℃～8℃条件下保存并送到实验室。

7细菌分离与鉴定

试剂耗材

绵羊血琼脂平板（配制方法见附录A.3）、革兰氏染色液、瑞氏染色液、生化鉴定管、细菌培养皿。

仪器

高压灭菌锅、恒温培养箱、光学显微镜、生物安全柜、组织匀浆器或研磨器。

样品处理

7.3.1将6.2.1中鼻拭子、咽拭子中的棉签反复挤压后取出，将鼻拭子液、咽拭子液分装到2mL灭菌

的冻存管中。贴标签于-80℃冰箱保存。

7.3.2将组织样品分解成2×2×3cm大小组织块，然后用无菌剪刀剪碎后，加入5mL保存液，研磨

成组织悬液，分装到2mL灭菌的冻存管中。