DB51/T 2964-2022 口岸松材线虫疫情监测技术规范

ICS65.020

CCSB16

DB51

四川省地方标准

DB51/T2964—2022

口岸松材线虫疫情监测技术规范

Technicalstandardformonitoringthepinewoodnematodeatports

2022-12-27发布2023-02-01实施

四川省市场监督管理局发布

DB51/T2964-2022

目次

前言................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4监测范围...........................................................................3

5应施监测的植物及其产品.............................................................3

6制定监测计划及实施方案.............................................................3

7监测方法...........................................................................3

8实验室检测.........................................................................4

9监测样品的保存及处理...............................................................6

10监测结果管理......................................................................6

附录A（资料性附录）松材线虫相关信息............................................7

附录B（规范性附录）口岸松材线虫疫情监测记录表.................................10

附录C（资料性附录）松材线虫组介绍及鉴定特征...................................11

附录D（资料性附录）松材线虫及其近似种.........................................17

附录E（规范性附录）特异PCR鉴定方法...........................................26

附录F（规范性附录）实时荧光PCR鉴定方法.......................................28

附录G（规范性附录）DNA条形码..................................................30

参考文献............................................................................32

I

DB51/T2964-2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由中华人民共和国成都海关提出、归口并解释。

本文件起草单位：成都海关技术中心、宁波海关技术中心、四川省农业科学院植物保护研究所。

本文件主要起草人：邵宝林、张婧、李星月、顾建锋、张涛、刘露希、杨益芬、王成华、鲁昕、陆

丽华、宿白玉、刘国瑛、张军、刘俊。

本文件为首次发布。

II

DB51/T2964-2022

口岸松材线虫疫情监测技术规范

1范围

本文件规定了口岸松材线虫监测范围、应施监测的植物及其产品、监测计划及实施、监测方法、实

验室检测、监测样品的保存及处理、监测结果管理。

本文件适用于口岸进出境松木及其制品、木质包装材料、松材线虫寄主繁殖材料以及监管场所周边

林地的松材线虫监测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T23476-2009松材线虫病检疫技术规程

GB/T23478松材线虫普查监测技术规程

SN/T1132-2002松材线虫检疫鉴定方法

SN/T1724-2006进境针叶树原木、木制品和木质包装材料中松材线虫的检疫操作规程

SN/T2757植物线虫检测规范

SN/T4350-2015旅客携带物和邮寄物检疫鉴定和处理程序

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

口岸port

是国家批准对外开放，允许人员、货物、交通工具、寄递物等进出国境的地方。

3.2

松材线虫pinewoodnematode

学名：Bursaphelenchusxylophilus(Steiner&Buhrer)Nickle,1970。松材线虫是一种植物寄生线虫，

属于小杆目（Rhabditida），垫刃亚目（Tylenchina），滑刃总科（Aphelenchoidea），滑刃科（Aphelenchoididae），

寄生滑刃亚科（Parasitaphelenchinae），伞滑刃属（Bursaphelenchus），能引起松树萎蔫病，是针叶树

木上最重要的病原生物之一。松材线虫相关信息参见附录A。

3.3

媒介昆虫intermediaryinsect

能携带松材线虫并能将松材线虫传递给寄主树木的天牛。在自然条件下，松材线虫需依靠墨天牛属

（Monochamus）的天牛实现近距离传播。

3.4

松褐天牛MonochamusalternatusHope,1843

1

DB51/T2964-2022

又名松墨天牛、松天牛，属于天牛科（Cerambycidae）、墨天牛属（Monochamus），是为害松树

的一种蛀干性昆虫，为传播松材线虫的主要媒介天牛。

3.5

云杉花墨天牛MonochamussaltuariusGebler,1830

又名云杉花黑天牛，属于天牛科（Cerambycidae）、墨天牛属（Monochamus），是一种蛀干性昆

虫，是松材线虫病的传播媒介昆虫。

3.6

木材wood

带皮或不带皮的原木、锯木、木板、木片等。

3.7

原木rawwoods

未经过干燥、化学防腐剂等处理，并未永久改变其特性的木材。

3.8

松木及其制品pinewoodandwoodenware

指松科木材和由松科木材为原料制作的产品，包括松木木质包装材料。经人工合成或经加热、加压

等深度加工的木质材料（如胶合板、纤维板等）除外。

3.9

木质包装材料woodpackingmaterials

用于承载、包装、铺垫、支撑、加固货物的木质材料，如木板箱、木条箱、木托盘、木框、木桶、

木轴、木楔、垫木、枕木、衬木等。

3.10

疫木diseasedwood

感染松材线虫病的寄主植物及其制品，主要为松属植物及其制品。

3.11

蓝变blue-stain

木材因松材线虫感染或其他原因，使得各种真菌在木材管胞或导管中大量繁殖，真菌菌丝分泌出着

色物将胞壁染色，促使木材蓝变的现象。蓝变是判断松材线虫监测抽样的一个重要依据。

3.12

海关指定监管场地customsdesignatedsupervisionsite

是指符合《海关监管作业场所（场地）的设置规范》，满足动植物疫病疫情防控需要，对特定进境

高风险动植物及其产品实施查验、检验、检疫的监管作业场地。

3.13

海关监管货物cargoundercustomssupervision

是指所有进出境货物，包括海关监管时限内的进出口货物，过境货物、转运货物、通运货物，特定

减免税货物，以及暂时进出口货物、保税货物和其他尚未办结海关手续的进出境货物。

3.14

诱捕器监测trapmonitoring

利用人工合成引诱剂来捕获松墨天牛，并检查其体内、体表是否携带松材线虫的一种监测方法。

3.15

松墨天牛引诱剂pinesawyerattractant

对松墨天牛成虫具有引诱活性的挥发性化合物，如萜烯类等特异性植物源物质、昆虫源信息素等，

需与松墨天牛诱捕器配合使用。

2

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4监测范围

海关监管作业场所（场地）及其周边。海关监管作业场所（场地）划分为监管作业场所和集中作业

场地。监管作业场所是指由企业负责经营管理，供进出境运输工具或者境内承运海关监管货物的运输工

具进出、停靠，从事海关监管货物的进出、装卸、储存、集拼、暂时存放等有关经营活动，符合《海关

监管作业场所设置规范》，办理相关海关手续的场所，包括水路运输类海关监管作业场所、公路运输类

海关监管作业场所、航空运输类海关监管作业场所、铁路运输类海关监管作业场所、快递类海关监管作

业场所等；集中作业场地是指从事海关监管货物的进出、装卸、储存、集拼、暂时存放等有关经营活动，

基本符合《海关监管作业场所（场地）设置规范》，有一定环境条件或检验、检疫专业要求，因经营主

体、属性等因素不具备“海关监管作业场所”管理条件，办理相关海关手续的作业场地，包括旅客通关

作业场地、邮检作业场地等。

5应施监测的植物及其产品

应施监测的植物及其产品为：来自国内外疫情发生区的松属、雪松属、冷杉属、云杉属和落叶松属

等松材线虫寄主植物的苗木、接穗、插条、盆景等生长繁殖材料；来自国内外疫情发生区的上述植物的

木材、枝桠、根桩、木片以及它们的制品；带有松材线虫及其传播媒介昆虫活体的货物、包装材料、铺

垫材料、运输工具、邮寄物及旅客携带物。松材线虫的寄主植物范围参见附录A.6。

6制定监测计划及实施方案

科学制定监测计划及具体实施方案。依据全国海关各口岸松材线虫疫情截获数据，结合本关区业务

实际设置监测区域，对应施监测的植物及其产品开展松材线虫疫情监测，即在海关监管作业场所重点对

海关监管货物的松木及其制品是否携带松材线虫进行监测；在海关集中作业场地开展进境邮寄物及旅客

携带物是否携带松材线虫的监测；在海关监管作业场所（场地）及其周边开展诱捕器监测，对诱捕的媒

介天牛是否携带松材线虫实施监测。重点关注来自美国、加拿大、墨西哥、日本、韩国、葡萄牙、西班

牙以及中国台湾等国家或地区的松木及其制品、邮寄物及旅客携带物。

7监测方法

7.1抽样监测

观察松木材质是否干燥，木质部是否有蓝变，有无媒介昆虫栖居的痕迹，如侵入孔、蛀道、蛹室等。

重点抽取材质干燥无松脂香味、有蓝变、有媒介昆虫栖居痕迹的松木或其加工制品，若无上述特征时，

可随机抽样。针对进境针叶树原木、木制品和木质包装材料的抽样监测，需结合单证查验，即核实产地、

品种、数量、证书等信息否与货物相符合，抽样及采样方法按照SN/T1724-2006中6.2和6.3执行。针对

邮寄物及旅客携带物的抽样监测，按照SN/T4350-2015中第5章和第6章内容，对可能携带松材线虫的所

有寄主植物及其繁殖材料、松木及其制品进行取样监测，不宜现场取样的可将其整体带回送实验室检测。

样品标识信息应完整、清晰，确保可溯源、可追查，规范填写附录表B.1。

7.2诱捕器监测

7.2.1诱捕器设置

3

DB51/T2964-2022

重点在口岸木材及木制品装卸地和木质包装集散点等重要疫情监测区域进行布点，每个诱捕器之间

相距50m～100m。周边有林地的按照GB/T23478执行。

7.2.2诱捕时间

诱捕时间一般为每年的4月下旬至10月底（不同地区有差异），即松墨天牛成虫羽化初期开始，直

至当年成虫羽化完毕为宜。

7.2.3松墨天牛引诱剂

可根据监测需要选用商品化的高效引诱剂。

7.2.4诱捕器安装、维护及媒介天牛的收集

诱捕器安装及维护在松墨天牛羽化前1d～5d，诱捕器应安装在空气流通较好的地方，悬空挂置，

诱捕器下端离地面1.5m～2.0m。诱捕器上下两端应用铁丝绑牢并固定，正确添加或更换引诱剂，应注

意防撒漏、防跌落，以免影响诱捕效果。

诱捕器应及时维护，结合查虫定期巡查诱捕器，清洗集虫罐，补充水淹式集虫罐中的清水。风雨过

后也要及时检查诱捕器，确保诱捕器处于良好的诱虫状态。定期添加诱剂，每隔10d～15d添加1次。

诱捕器每隔3d～5d检查一次，及时收集并清理诱捕器中的媒介天牛，并在当日送实验室检测。

详细记录相关信息，填写附录表B.2。

7.2.5安全事项

松墨天牛引诱剂属于易燃品，在运输、储存和使用过程中，应遵守国家有关易燃品安全管理的有关

规定和安全使用方法。

8实验室检测

8.1松材线虫的分离

疑似松材线虫疫木样品，采用贝尔曼漏斗法或浅盘法或改进型线虫分离器法分离线虫，具体操作按

照GB/T23476-2009中附录C执行。分离时室内温度应保持在20℃～30℃之间，或置于恒温培养箱中进

行分离，分离时间一般需12h～24h。用直径约10cm的凹面皿或培养皿接取少量线虫分离液（大约10ml），

置体视显微镜下镜检（放大倍率10X～20X为宜）。媒介昆虫样品的分离，可将天牛剪碎后直接分离或

可采用局部分离线虫的方法分离线虫，即将天牛的触角端部或胸部腿节取下，捣碎后用漏斗法或浅盘法

分离线虫，也可直接浸泡于加水的表面皿或培养皿中，2h后在体视显微镜下直接观察是否有线虫。

8.2镜检

在体视显微镜下，用100µL～200µL移液器吸取线虫（根据虫量多少，一般吸取线虫数10条为宜，

以避免漏检），转移到载玻片上，液滴体积50µL左右为宜。在酒精灯上以1s左右的频率通过8次～

10次，使线虫恰好被杀死为宜。加盖玻片，制成临时玻片。若分离的线虫均为幼虫或数量极少影响后

续鉴定时，可培养获得成虫后再进行鉴定。

一般要求观察线虫20条以上。如发现样品中线虫幼虫较多，或者样品中线虫种类较为复杂，应加大

观察数量，以防漏检。如果每份样品的分离液中线虫含量在20条以下的，全部制成临时玻片镜检。一般

鉴定要求至少发现雌虫和雄虫各1条以上。

仔细观察雌虫和雄虫主要鉴定特征并显微摄影，主要鉴定特征包括雌虫、雄虫唇区、口针、中食道

球、尾部，尤其注意雌虫阴门区以及雄虫交合刺，并拍摄显微照片。一般在40倍物镜下，拍摄雌虫头

4

DB51/T2964-2022

部、阴门区、尾部各1张照片，拍摄雄虫头部和尾部各1张照片，必要时在100倍油镜下拍摄。显微镜配

置微分干涉（DIC）功能可提高观察效果，以获得更清晰的照片。应在每张图片上加相应标尺。必要时，

测量并计算体长/虫体最宽处体宽（a）、体长/尾长（c）、尾长/肛门处体宽（c’）等值。如样品足够，

应测量雄虫、雄虫各20条以上。测计方法参考SN/T2757。

8.3半永久标本及永久标本的制作

按照SN/T1132-2002中附录C.2相关内容执行。

8.4线虫培养

按照SN/T1724-2006中附录B执行。

8.5松材线虫检测鉴定

8.5.1鉴定流程

分离获得线虫后，一般先进行形态学鉴定。形态学鉴定以雌、雄虫的形态特征为依据，判定为松材

线虫组线虫后，在发现雌雄成虫的情况下，一般可快速根据形态特征做出判定。鉴定松材线虫时，如仅

发现雄虫和（或）幼虫，则无法进行形态鉴定；如仅有雌虫，有经验的鉴定人员可做出初步鉴定结论，

并应进一步请专家复核确认；如仅发现雄虫和（或）幼虫、样品来自非疫区、实验室首次发现、形态鉴

定结果存疑等情况，应进一步用特异PCR、实时荧光PCR或DNA条形码等任何一种方法进一步鉴定，或

联系相关专家复核。

特异PCR、实时荧光PCR或DNA条形码等任何一种方法均能对松材线虫进行准确鉴定，也可作用形

态学鉴定的补充。

8.5.2形态学鉴定

松材线虫形态学鉴定按照SN/T1132-2002中第8章执行。松材线虫组介绍及鉴定特征详见附录C，松

材线虫及其近似种显微特征详见附录D。

8.5.3分子生物学检测

松材线虫特异PCR检测见附录E，实时荧光PCR检测见附录F，DNA条形码鉴定见附录G。

8.5.4结果判定及复核

结果判定

形态学鉴定符合8.5.2形态特征的，可鉴定为松材线虫；疑似松材线虫的标本经外送专家或专业检测

机构鉴定或复核的，可采纳专家出具的结果进行判定。

分子生物学检测依据附录E～附录G相关内容进行判定，检测结果呈阳性的可鉴定为松材线虫。

复核

对首次检出松材线虫的结果，需经过专家复核或相关专业检测实验室复核。其中相关专业检测实验

室是指具备相应检测技术能力的实验室，即实验室获得CNAS认可的有效能力范围覆盖松材线虫检测项目。

提供复核的材料为具松材线虫雌雄成虫的线虫分离液、临时玻片、照片、分子检测数据或影像材料等。

9监测样品的保存及处理

5

DB51/T2964-2022

监测样品应及时分离鉴定，若需要保存，应在4℃条件下保存。如木屑、木片或木条等样品，可放

入塑料袋内，扎紧袋口，在袋上扎几个小孔，放入4℃冰箱；木段、圆盘可直接裹上几层湿纱布后放入

4℃冰箱保存。若需保存时间较长，样品需经常喷水保湿。对不宜保存的样品（如媒介天牛样品），应

及时销毁或灭活处理，确保疫情不扩散。

样品保存应做好登记工作，并做好标识，信息可追溯。经检测发现含有松材线虫的样品（不宜保存

的样品除外），保存期不少于6个月，以备复查、谈判或仲裁。

保存期满后，含松材线虫的样品必须销毁（如焚烧、粉碎）或灭活处理（疫木样品中心温度在56℃

以上时，处理时间不少于30min）。

10监测结果管理

严格监测数据保密工作，未经许可，任何单位或个人不得擅自对媒体、单位、个人通报或发布监测

结果，更不得擅自在学术论文、刊物上发表。监测相关的原始记录、表格、检测报告及标本应妥善保存，

并按档案要求进行管理，保存期限为3年。

一经发现并确认监测到松材线虫的有关情况，应立即向属地监管部门和行业主管部门报告，同时做

好数据核查、溯源分析等工作，必要时按照四川省重大植物疫情防控管理要求及时启动应急预案响应。

6

AADB51/T2964-2022

附录A

（资料性附录）

松材线虫相关信息

A.1发现历史和背景

松材线虫最早于1929年从美国德克萨斯州的长叶松（Pinuspalustris）木材中分离到，被描述为

AphelenchoidesxylophilusSteiner&Buhrer，1934。当时观察到带线虫的木段有蓝变现象，认为该线虫可

能通过昆虫传播，能在多种真菌上繁殖，但没有认识到其致病性。尽管日本早在1905年就有关于大量松

树枯死的记录，损失巨大，但长期未找到病因。直到1971年，Kiyohara等研究认为一种伞滑刃属线虫是

日本松树枯萎病病原。1972年，Mamiya等将该病原线虫描述为Bursaphelenchuslignicolus。1981年，Nickle

等确认其为异名，松材线虫从此被定名为Bursaphelenchusxylophilus（Steiner&Buhrer，1934）Nickle，

1970。

目前，专家普遍认为松材线虫发源于北美洲，在美国、加拿大等国的针叶木（主要是松属）中普遍

发生，但本土的松树品种大多数抗性较强，因此松树枯萎病仅零星发生，为害很小。其原因可能是北美

松材线虫与松树长期共同进化，松树获得了较强的抗病性或耐病性，并且当地传媒天牛传播松材线虫的

效率也相对较低，同时有大量的自然天敌存在。然而，当松材线虫通过北美输出的松木原木、木质包装

等传入亚洲、欧洲各国后，由于寄主、媒介昆虫、环境及天敌等条件的改变，松材线虫引起了巨大的为

害。

在日本，松材线虫可能在20世纪初通过从美国大量进境松木产品而传入。日本对松材线虫及其媒介

昆虫