DB37/T 3320-2018 水貂、狐和貉常见细菌实时荧光PCR检测方法

ICS65.020.30

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T3320—2018

水貂、狐和貉常见细菌实时荧光PCR检测

方法

Real-timefluorescentPCRfordetectingofcommonbacterialpathogensofmink、fox

andraccoondog

2018-06-12发布2018-07-12实施

山东省质量技术监督局发布

DB37/T3320—2018

前言

本标准按照GB/T1．12009给出的规则起草。

本标准的附录为资料性附录。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：山东省动物疫病预防与控制中心、山东大学生命科学学院。

本标准主要起草人：王贵升、张鹤晓、王金宝、田夫林。

I

DB37/T3320—2018

水貂、狐和貉常见细菌实时荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了水貂、狐和貉常见细菌（大肠杆菌、绿脓杆菌、克雷伯氏菌、嗜水气单胞菌、沙门氏

菌、柠檬酸杆菌、不动杆菌）实时荧光PCR检测方法。

本标准所适用于水貂、狐和貉的常见细菌的快速筛查和检测，其他动物细菌可参考本标准。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3缩略语

荧光定量PCR荧光定量聚合酶链式反应。

Ct值每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环圈数。

DNA脱氧核糖核酸。

Taq酶TaqDNA聚合酶

PBS磷酸盐缓冲生理盐水

4试剂和材料

4.1荧光定量PCR检测仪及配套反应管（板）。

4.2高速台式冷冻离心机（离心速度12000r/min以上）。

4.3混匀器。

4.4恒温水浴锅。

4.5冰箱（2℃～8℃和-20℃两种）。

4.6微量移液器（0.5L～10L，5L～20L，20L～200L，200L～1000L及配套吸头。

4.71.5mL离心管（无核酸酶）。

4.8可以选用经验证效果好的细菌DNA柱式提取试剂盒，或按照附录A配制试剂。

5样品的采集与前处理

采样过程中样本不得交叉污染，采样及样品前处理过程中须戴一次性手套。

5.1取样工具

1

DB37/T3320—2018

5.1.1棉拭子、剪刀、镊子、研钵、Eppendorf管。

5.1.2所有上述取样工具必须经（121±2）℃，15min高压灭菌并烘干或经160℃干烤2h。

5.2采样方法

5.2.1拭子样品

咽喉拭子采样，采样时要将拭子深入喉头及上腭来回刮3次～5次，取咽喉分泌液。

肛拭子采样，采样时要将拭子深入肛门回刮3次～5次，取排泄物。

5.2.2内脏或肌肉样品

用无菌的剪刀和镊子剪取待检