T/JSAE 1-2024 基于DNA条形码的寄生蜂鉴定方法

ICS65.020.01

CCSB15

团体标准

T/JSAE1—2024

基于DNA条形码的寄生蜂鉴定方法

IdentificationMethodforParasitoidWaspsBasedonDNA

Barcoding

2024-08-21发布2024-08-22实施

江苏省农业工程学会发布

T/JSAE1—2024

目次

前言.................................................................................................................................................II

1范围.................................................................................................................................................1

2规范性引用文件.............................................................................................................................1

3术语和定义.....................................................................................................................................1

4方法原理.........................................................................................................................................2

5仪器设备、试剂与实验准备.........................................................................................................2

6鉴定步骤.........................................................................................................................................3

7结果判定.........................................................................................................................................6

附录A................................................................................................................................................5

附录B.................................................................................................................................................7

附录C.................................................................................................................................................8

参考文献.........................................................................................................................................9

I

T/JSAE1—2024

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规

则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由江苏沿海地区农业科学研究所提出。

本文件由江苏省农业工程学会归口。

本文件起草单位：江苏沿海地区农业科学研究所，中国农业科学院植物保护研究所，

盐城师范学院。

本文件主要起草人：孙星星、张礼生、王凡、蒋颖洁、黎文建、王凯、胡积祥、石童、

李红阳、高波、于鹏、张成硕。

II

T/JSAE1—2024

基于DNA条形码的寄生蜂鉴定方法

1范围

本文件描述了采用DNA条形码方法进行寄生蜂鉴定的方法原理、仪器设备、试剂与实

验准备、鉴定步骤和结果判定。

本文件适用于寄生蜂成虫的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日

期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本

（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

WS/T230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

寄生蜂Parasitoidwasp

营寄生习性的膜翅目Hymenoptera昆虫的统称。

3.2

DNA条形码DNAbarcoding

生物体内用于物种鉴定的一段标准的、易于扩增的相对较短的DNA片段，可用于生物

的识别与鉴定。

3.3

种Species

在自然界能够交配、产生可育后代，并与其他物种存在生殖隔离的群体。

3.4

聚合酶链式反应Polymerasechainreaction;PCR

1

T/JSAE1—2024

用于扩增位于两段已知序列之间DNA的分子生物学技术。

3.5

引物Primer

与特定DNA片段两端序列互补的人工合成的寡核苷酸短片段，用于PCR过程。

3.6

Phred质量分数Phredqualityscore

评估测序反应准确性的质量指标，表示碱基信号错误概率。

3.7

序列相似度Sequencesimilarity

两条序列相似的残基与相同的残基的数目占总长度的百分数。

4方法原理

DNA条形码方法根据种间变异大于种内变异的基本原理，从待检寄生蜂样本中获取特

定基因区段（如COI基因）的DNA序列，通过测序并与已知物种的数据库进行比对，实现

物种的快速、准确鉴定。

5仪器设备、试剂与实验准备

5.1仪器设备

5.1.1鉴定工具：解剖镜、光学显微镜、镊子等。

5.1.2低温高速离心机：离心力在10000rpm以上，温控可低至4℃。

5.1.3微量分光光度计：测量体积最小1L，波长范围包括230nm、260nm和280nm。

5.1.4PCR仪。

5.1.5核酸电泳仪。

5.1.6凝胶成像系统。

5.1.7超净工作台：平均风速为0.25~0.6m/s。

5.1.8超低温冰箱：最低达-80℃。

5.1.9冰箱：温度范围为-20℃~4℃。

5.1.10天平：精度为0.0001g。

5.1.11恒温水浴锅：工作范围为30℃~70℃。

5.2主要试剂

5.2.1DNeasyBlood&TissueKit：QIAGENGmbH生产。

2

T/JSAE1—2024

5.2.2超纯水ddH2O：符合GB/T6682标准。

5.2.3乙酸（C2H4O2）。

5.2.4三羟甲基氨甲基甲烷（C4H11NO3）。

5.2.5乙二胺四乙酸（EDTA）。

5.2.6PCR缓冲液。

5.2.7电泳缓冲液TAE（由C4H11NO3、EDTA和C2H4O2组成）。

5.2.8核酸染料。

5.2.9TaqPCRStarMix。

6鉴定步骤

6.1通则

DNA提取和PCR扩增遵照WS/T230的要求。

6.2取样

样本经冷冻或乙醚麻醉，置于灭菌的洁净1.5mL离心管中。如长期不用需放置在无水

乙醇内-20℃保存。普通样本需去除腹部组织，珍稀样本取对称一侧组织（如单侧寄生蜂

足）。

6.3DNA提取

6.3.1试剂盒法

采用DNeasyBlood&TissueKit试剂盒。

6.4DNA定量

采用紫外分光光度法或荧光定量法对寄生蜂DNA提