DB15/T 1938-2020 沙地云杉组织培养技术规程

ICS65.020.20

B05

DB15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T1938—2020

沙地云杉组织培养技术规程

TechnicalRegulationforTissueCultureofPiceamongolica

2020-07-30发布2020-08-30实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T1938—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。

本标准由内蒙古自治区林业和草原局提出并归口。

本标准起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古蒙荣园林绿化工程有限责任公司。

本标准主要起草人：白玉娥、韩彦龙、哈布尔、代金玲、包文泉、彭鹏、娜苏勒玛、苗慧琴。

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DB15/T1938—2020

沙地云杉组织培养技术规程

1范围

本标准规定了沙地云杉组织培养育苗的术语和定义、环境器具消毒灭菌、培养基、外植体、胚性愈

伤组织诱导、胚性愈伤增殖培养、体细胞胚胎分化培养、体胚干化萌发培养、炼苗、移植培养等基本内

容及技术要求。

本标准适用于利用沙地云杉组织培养技术生产苗木。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程。

DB15/T1588元宝枫组织培养育苗技术规程。

3术语和定义

LY/T1882和DB15/T1588界定的术语和定义适用于本文件。

4环境器具消毒灭菌

4.1洗涤室和接种室消毒

工作前和结束后，使用臭氧紫外灯照射1h。

4.2培养室消毒灭菌

每天工作结束后使用臭氧紫外灯照射消毒2h。如有较严重的组培苗感染现象，应采用甲醛(HCHO，

10mL/m³)和高锰酸钾(KMnO4，5g/m³)混合薰蒸消毒，在密闭条件下熏蒸消毒20min～30min，消毒后

要打开门窗通风换气。

4.3超净工作台消毒灭菌

接种前用臭氧紫外灯照射消毒不少于30min，并用70%酒精喷洒消毒台面；定期清洗超净工作台的

过滤膜。

4.4器具灭菌

4.4.1接种器具灭菌

在一个接种台班结束后，使用器具流水冲洗后，用锡箔纸包好，置于高压灭菌锅灭菌。接种工具使

用前，用酒精灯外焰灼烧20s以上，或用接种工具灭菌器直接灭菌。

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DB15/T1938—2020

4.4.2培养容器消毒灭菌

使用后的培养容器，流水冲洗残留培养基，高压灭菌锅消毒后存放。

5培养基

5.1基本培养基

胚性愈伤诱导、增殖和分化均采用1/2LM基本培养基，干化萌发培养采用1/2MS基本培养基。

5.2母液和激素配制与保存

5.2.1母液和激素配制

培养基母液配制见附录A.1、A.2。激素均配制浓度为1.0mg/mL。

5.2.2母液和激素保存

母液和激素配制后，贴标签，记录溶液名称、配置时间、配置者，并在4℃条件下保存。母液应于

3个月之内使用，母液无结晶、无异色才能使用。

5.3基本培养基配制

5.3.1琼脂融化

以配置1L培养基为例（下同），加蒸馏水700mL左右，再加入5.5g～6g琼脂，加热搅拌使琼脂

融化。

5.3.2糖溶解

琼脂融化后，加入20g蔗糖，搅拌使糖溶解。

5.3.3加母液

糖溶解后，按照附录A.1或附录A.2的要求加入母液，搅拌均匀。

5.3.4培养基定容

搅拌均匀后，加蒸馏水定容至1L。

5.3.5基本培养基pH值调节

充分搅拌后，将基本培养基pH值调节至5.7～5.8。

5.3.6基本培养基分装

使用240mL规格的培养瓶定量分装，胚性愈伤诱导、增殖、分化培养均每瓶分装50mL；干化萌发

培养使用350mL规格的培养瓶，每瓶分装65mL，分装时勿将培养基沾在培养瓶瓶口。

5.3.7培养瓶封口

盖紧瓶盖，或用封口膜封口。

5.3.8培养基灭菌

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DB15/T1938—2020

用高温高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，蒸气压力102.9kPa（1.05kg/cm2），温度121℃条件下保持15

min～20min即可。

5.3.9培养基冷却

灭菌后的培养基放在无菌环境中冷却，待完全凝固后使用。

5.3.10培养基贮存

灭菌后的培养基应标明编号、种类、配制日期，在4℃无菌条件下贮藏备用，贮存时间不应超过1

个月。

6外植体

6.1球果采集与清洗

8月初，采集授粉第10周的未成熟球果，清洗表面。

6.2种子剥离与灭菌

球果中剥取未成熟种子置于清水中，取下沉的种子置于培养皿中，用75%酒精浸泡30s～40s，无

菌水冲洗3次，再以2%次氯酸钠浸泡灭菌6min，无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸附残留水分。

6.3外植体制备

在