GB/T 24862-2010 畜禽体细胞库检测技术规程

ICS65.020.30

B40OB

中华人民共和国国家标准

GB/T24862—2010

畜禽体细胞库检测技术规程

Technicalregulationoffarmanimalssomaticcellbankdetection

2010-06-30发布2011-01-01实施

发布

GB/T24862—2010

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口。

本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：马月辉、关伟军、李向臣、于太永、李哈、何晓红、刘涛。

T

GB/T24862—2010

畜禽体细胞库检测技术规程

1范围

本标准规定了畜禽体细胞库检测方法。

本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽体外培养细胞鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

细胞活率cellmotilityrate

活细胞占总细胞的百分比。

3.2

细胞生长曲线cellgrowtcurve

在一代细胞生存期内.依据潜伏期、指数增长期、停滞期和衰亡期细胞动态变化的数值，以细胞培养

吋间为横坐标、细胞密度为纵坐标而绘制的细胞生长规律曲线。

3.3

核型karyotype

体细胞分裂中期整套染色体按照其数目、长度、着丝点位置、随体、主缢痕和次缢痕等相对恒定特征

排列起来的图像。

3.4

同工酶isozyme

功能相同结构各异的一类催化酶。

3.5

汇合度confluency

细胞占其培养表面的比例。

4工作区条件

工作区一般要由准备室、缓冲间、无菌室、细胞保存室组成。

其中，缓冲间面积应不小于3m2，并设有更衣柜和紫外灯,紫外灯的强度不少于1.5W/n?。紫外线灯

管距地面不应超过2.5m,每次照射吋间为20min~30mino无菌室无菌等级的最低标准应达到万级。

5主要仪器、设备

电泳仪及电泳槽、超净工作台、冰箱、鼓风干燥箱、高压蒸汽消毒器、液氮生物容器、离心机、电子天

平、恒温培养箱、C（）2培养箱、超纯水装置、凝胶自动成像分析系统和显微镜等。

1

GB/T24862—2010

6清洗与消毒

6.1玻璃器皿清洗与消毒

6.1.1浸泡

所需的玻璃器皿在含有洗涤剂的清水中浸泡120

6.1.2刷洗

选软毛毛刷，反复洗刷后用清水冲洗3次，三蒸水冲洗3次后，60C下烘干后备用。

6.1.3酸浸

酸浸时间为24o

6.1.4冲洗

酸浸后先用自来水反复冲洗10次以上，最后用重蒸水浸洗3次〜5次，烘干包装。

6.1.5消毒

高压灭菌应以0.14MPa〜0.16MPa的压力下持续15min〜30min。

6.1.6初次玻璃器皿使用

初次使用玻璃器皿需要先经过浸泡和洗刷再置于5%稀盐酸溶液中浸泡12以上，其余操作同

6.1.3、6.1.4和6.1.5等步骤。

6.2金属器皿清洗与消毒

金属材质的器具除了没有酸浸处理步骤外，其余步骤同6.1。

6.3塑料与橡胶制品清洗与消毒

塑料和橡胶材质的器具用清水浸泡和冲洗同玻璃器皿清洗，之后还需要用2%的Na()H溶液浸泡

12h,清水冲洗和烘干后用1%稀盐酸浸泡30min,再用清水和三蒸水分别冲洗3次，高压灭菌和烘干

后备用。高压灭菌以0.073MPa的压力下持续10min。

7主要试剂与溶液配制

主要试剂与溶液配制参见附录A。除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合

GB/T6682—级用水的要求

8体外培养细胞鉴定

&1细胞形态检测

&1.1光学显微镜检测

在倒置相差显微镜下，直接观察和记录培养细胞的形态和生长状况。刚贴壁细胞边界清晰，核呈圆

形，核浆比率小，细胞排列整齐，无重叠生长。

&1.2Giemsa染色检测

将盖玻片置于细胞培养瓶中，在5%C()2培养箱中37€培养，细胞形成单层后，取出盖玻片，用磷

酸缓冲盐溶液(phosphat