DB34/T 3488-2019 猪链球菌的分子分型MLST方法

ICS01.120

A00

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3488—2019

猪链球菌的分子分型MLST方法

MultilocussequencetypingdetectionmethodforStreptococcussuis

文稿版次选择

2019-12-25发布2020-01-25实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3488—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽浩翔农牧有限公司提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽浩翔农牧有限公司、安徽冠华农牧有限公司、安徽杜洛克种猪育种有限责任

公司、安徽农业大学、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所、怀宁县动物疫病预防

与控制中心，巢湖市畜牧兽医局、六安市动物疫病预防与控制中心。

本标准主要起草人：高亚飞、占松鹤、何长生、谢玉洁、程竹兵、李春芬、程圣芳、段倩倩、李郁、

孙裴、袁献宇、刘雪兰、徐小伟、高亚成。

I

DB34/T3488—2019

猪链球菌的分子分型MLST方法

1范围

本标准规定了猪链球菌的分子分型MLST的术语和定义、试剂和材料、仪器和设备、操作步骤、生

物安全和防污染措施。

本标准适用于猪链球菌的分子分型检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

DB34/T2996猪链球菌检验操作规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

MLSTmultilocussequencetyping

一种基于核酸序列测定的细菌分型方法，通过PCR扩增多个管家基因内部片段，测定其序列，分

析菌株的变异，从而进行分型。

3.2

管家基因house-keepinggenes

所有细胞中均要表达的一类基因，其产物是维持细胞生命活动所必需的，其基因序列高度保守并且

在大多数情况下持续表达。

4试剂和材料

4.1实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。

4.2除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，应用无DNA酶污染的容器分装。

4.3细菌基因组DNA提取试剂盒。

4.4普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

4.5TaqDNA酶。

1

DB34/T3488—2019

4.6dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

4.7引物：猪链球菌管家基因的扩增引物序列和测序引物序列见表1。

表1猪链球菌管家基因的扩增引物序列和测序引物序列

名称序列（5’→3’）

aroA（Forward）TTCCATGTGCTTGAGTCGCTA