DB22/T 2921-2018 禽白血病A/B/J亚群检测 PCR法

ICS11.220

B41

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2921—2018

禽白血病A/B/J亚群检测PCR法

DetectionmethodofPCRofavianleukosisA,BandJ-subgroups

2018-11-12发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T2921—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。

本标准主要起草人：曹利利、郭衍冰、董航、姚新华、苑淑贤、程荣华、邵洪泽。

I

DB22/T2921—2018

禽白血病A/B/J亚群检测PCR法

1范围

本标准规定了禽白血病A/B/J亚群PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于禽白血病A/B/J亚群的核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3试剂或材料

3.1试剂

3.1.1病毒基因组DNA提取试剂盒。

3.1.2阳性对照，为禽白血病病毒基因组DNA，或含有上述片段的质粒标准分子DNA。

3.1.3阴性对照，健康鸡血液或血清DNA。

3.1.410×PCR缓冲液，见附录A.1。

3.1.510mmol/LdNTPs。

3.1.62U/μLTaqDNA聚合酶。

3.1.7水为DEPC处理过的双重蒸馏水（ddH2O），符合GB/T6682的规定。

3.1.850×TAE电泳缓冲液，见附录A.2。

3.1.910mg/mL溴化乙锭（EB）溶液，见附录A.3或其他同类型可替代物。

3.1.101.0%琼脂糖凝胶，见附录A.4。

3.1.11上样缓冲液，见附录A.5。

3.1.12标准分子量DL2000Marker。

3.2材料

3.2.110μL、200μL和1000μL吸头。

3.2.21.5mL离心管。

3.2.3无菌棉拭子。

3.2.40.2mL薄壁PCR管。

3.3引物

引物序列、浓度及扩增长度见表1。

1

DB22/T2921—2018

表1引物序列及浓度

引物引物序列使用浓度扩增长度

上游引物F5′-GCCAAACGGATTTCTGCCTT-3′

AR5′-AACCCAGATACCAAGGAACC-3′375bp

10μmol/L

下游引物BR5′-ACAGATGGACCAATTCTGTCTC-3′581bp

JR5′-ATTGTTCCACAACACCTCTG-3′683bp

4仪器设备

4.1微量移液器，2.5μL、20μL、200μL、1000μL。

4.2电子天平，感量0.1mg。

4.3均质器。

4.4低温高速