NY/T 679-2003 猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法

ICS11.220

B41

中华人民共和国农业行业标准

NY/T679-2003

猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法

Enzymeimmunoassayforporcniereproductiveandrespiratorysyndrome

2003-07-30发布2003-10-01实施

中华人民共和国农业部发布

NY/T679-2003

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本标准的附录A为规范性附录。

本标准山农业部畜牧兽医局提出并归日。

本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。

本标准主要起草人:土宏伟、王传彬、陈西钊、田克恭。

NY/T679-2003

猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法

范围

本标准规定了猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)免疫酶试验和免疫酶组织化学方法。

本标准适用于检测猪血清中的猪繁殖与呼吸综合症病毒((PRRSV)抗体和组织中的PRRSV抗原

2免疫酶试验

2.，材料准备

2.1.1试剂

2.1.1.1磷酸盐缓冲液(PBS):配制见第A.1章。

2.1.1.2抗原涂片的制备:PRRSV接种于生长至70Y,-80%单层的Marc145细胞接种后3d-

4d，病变达50%075%时，用胰蛋白酶消化分散感染的细胞单层,PBS洗涤三次后，稀释至1X700个细

胞/ml取印有10个一40个小孔的室玻片，每孔滴加10阿室温自然干燥后，冷丙酮(40C)固定

10min密封包装，置一20℃备用

2.1.1.3标准阳性血清:PRRSV试验感染猪制备的血清。

2.1.1.4标准阴性血清:无PRRSV感染、未经免疫的猪血清

2.1.1.5酶结合物:辣根过氧化物酶(HRP)标记的葡萄球菌A蛋自(SPA)

2.1.1.6底物溶液:配制见第A.2章。

2.1.2器材

a)普通光学显微镜;

b)印有10个一4。个小孔的室玻片;

c)微量加