DB37/T 3128.2-2020 Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术 第2部分：血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染PCR和荧光定量PCR诊断技术

ICS65.020.30

B41

DB37

山东省地方标准

DB37/T3128.2—2020

Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术第2部分：血

清4型Ⅰ群禽腺病毒感染PCR和荧光定量

PCR诊断技术

DiagnostictechniquesforfowladenovirusgroupIPart2:Detectionmethodon

fowladenovirusgroupIserotype4byPCRandquantitativereal-timePCR

2020-06-08发布2020-07--08实施

山东省市场监督管理局发布

DB37/T3128.2—2020

前言

本标准按照GB/T1.1－2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东农业大学。

本标准主要起草人：刁有祥、唐熠、杨晶、王鸿志、陈浩、冯强、张吉、宋存鑫、李伟。

I

DB37/T3128.2—2020

Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术第2部分：血清4型Ⅰ群禽腺病毒感

染PCR和荧光定量PCR诊断技术

1范围

本标准规定了血清4型Ⅰ群禽腺病毒聚合酶链式反应（PCR）与实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法

的范围、规范性引用文件、术语和定义、实验室要求、样品、结果判定等。

本标准所规定的血清4型Ⅰ群禽腺病毒PCR与实时荧光定量PCR检测方法适用于检测鸡组织、分泌物、

排泄物和鸡胚尿囊液及细胞培养液中血清4型Ⅰ群禽腺病毒的核酸，也适用于鸭、鹅及鸭胚、鹅胚尿囊

液血清4型Ⅰ群禽腺病毒核酸的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

血清4型Ⅰ群禽腺病毒FowladenovirusgroupISerotype4

是引起禽心包积水-肝炎综合征的病原，主要造成3周龄～5周龄家禽突然死亡，并伴随有心包积水

和肝炎。

3.2

实时荧光定量PCRQuantitativeReal-timePCR（qPCR）

通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结

合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。

4实验室要求

4.1环境

4.1.1实验室符合GB19489和GB/T27401要求，实验室必须为生物安全Ⅱ级（BSL-2级）及以上实验

室。

1

DB37/T3128.2—2020

4.1.2从事PCR工作的实验室应进行分区，根据条件划分出前处理区、核酸提取区、核酸扩增区、电

泳检测区，形成有效的物理隔离，且为单一流向，不得倒流。特别注意电泳后的琼脂凝胶要及时处理，

避免对实验室造成污染。

4.1.3生物样品应严格控制对环境的污染，试验结束后应将相关样品收集高压灭菌后，送有资质的医

用垃圾处理公司做处理。

4.2人员

操作人员应接受实验室生物安全、实验室质量管理、细胞培养和分子生物学实验室检测技术培训。

熟悉生物样品处理、细胞培养、以及核酸提取、基因扩增等分子生物学技术，熟悉PCR与qPCR检测结果

的判断方法。

4.3仪器设备

4.3.1生物安全柜。

4.3.2PCR仪（温度差小于0.3℃）。

4.3.3台式低温高速离心机（最大转速为15000rpm）。

4.3.4电泳仪。

4.3.5电泳槽。

4.3.6紫外凝胶成像仪。

4.3.7冰箱：2℃～8℃。

4.3.8冰柜：-20℃。

4.3.9微量移液器（最大量程分别为10