DB15/T 3170-2023 籽用西葫芦种子病毒RT-PCR检测技术规程

ICS65.020.01

CCSB21

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3170—2023

籽用西葫芦种子病毒RT-PCR检测技术规程

TechnicalcodeofpracticeforRT-PCRdetectionofseed-used

pumpkin(CucurbitapepoL.)seedvirus

2023-09-15发布2023-10-15实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T3170—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC25）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学。

本文件主要起草人：王萍、刘杰才、陈贵华、许珂、尚鹏、李石恒、毕晓宇。

I

DB15/T3170—2023

籽用西葫芦种子病毒RT-PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了籽用西葫芦种子病毒RT-PCR检测技术中涉及的试剂与材料、仪器和设备、对照设置、

样品采集、样品病毒检测、结果分析与表述。

本文件适用于籽用西葫芦种子中黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）、西瓜花叶病毒

（Watermelonmosaicvirus，WMV）、小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV）

的RT-PCR检测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

黄瓜花叶病毒cucumbermosaicvirus，CMV

黄瓜花叶病毒(CMV)属于雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus），可以

侵染1000多种植物。主要通过蚜虫以口针型非持久方式传播，也是典型的种传病毒。黄瓜花叶病毒一般

为系统侵染植物，主要表现为叶片斑驳，叶肉浅绿，叶脉深绿；严重时呈现叶片皱缩，叶肉退化，蕨叶

等症状。

西瓜花叶病毒watermelonmosaicvirus,WMV

西瓜花叶病毒（WMV）属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus），在自然

界中通过蚜虫以非持久性方式传播，也可经汁液摩擦接种传播，可侵染葫芦科、豆科、藜科等多种植物

种类。受侵染的病株叶片表现花叶、畸形、新生叶片扭曲，植株生长受阻，果实畸形。

小西葫芦黄化花叶病毒zucchiniyellowmosaicvirus，ZYMV

小西葫芦黄化花叶病毒（ZYMV）属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属（Potyvirus），

可由多种蚜虫以非持久性方式传播，也能通过种子传播。可侵染葫芦科、苋科、豆科等11个属的植物。

小西葫芦黄化花叶病毒表现为系统侵染，整株花叶、黄化、叶片皱缩、果实畸形、表面有泡状或者瘤状

突起。

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4试剂与材料

琼脂糖。

核酸染料。

10mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再

加水定容至200mL。

0.5mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)溶液(pH8.0)：称取186g乙二胺四乙酸二钠，加入70

mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(见4.3)直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液(见4.3)调pH至8.0

加水定容至100mL。在121℃条件下灭菌20min。

1mol/I三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCI)溶液(pH8.0)：称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解

于800mL水中，用盐酸调pH至8.0加水定容至1000mL。在121℃条件下灭菌20min。

TE缓冲液(pH8.0)：分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液(见4.5)和2mL乙二胺四乙酸

二钠溶液(见4.4)，加水定容至1000mL。在121℃条件下灭菌20min。

50×TAE缓冲液：称取242.2g三羟甲基氨基甲烷(Tris)，先用500mL水加热搅拌溶解后，加入

100mL乙二胺四乙酸二钠溶液(见4.4)，用冰乙酸调pH至8.0，然后加水定容至1000mL。使用时用水

稀释成1×TAE。

加样缓冲液：称取250.0mg溴酚蓝，加入10mL水，在室温下溶解12h；称取250.0mg二甲基

苯腈蓝，加10mL水溶解；称取50.0