GA/T 1608-2019 法庭科学 生物检材中河豚毒素检验 液相色谱-质谱法

ICS13.310

A92GA

中华人民共和国公共安全行业标准

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法庭科学生物检材中河豚毒素检验

液相色谱-质谱法

Forensicsciences—Examinationmethodsfortetrodotoxininbiological

samples—LC-MS

××××-××-××发布××××-××-××实施

中华人民共和国公安部发布

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并归口。

本标准起草单位：司法鉴定科学研究院、公安部物证鉴定中心。

本标准主要起草人：刘伟、沈敏、卓先义、沈保华、向平、严慧、于忠山、王芳琳。

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法庭科学生物检材中河豚毒素检验液相色谱-质谱法

1范围

本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中河豚毒素的液相色谱-质谱

（LC-MS）定性定量检验方法。

本标准适用于法庭科学生物检材中河豚毒素的定性、定量分析。其他可疑样品中河豚毒素的定性、

定量分析可参照使用。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相

色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征碎片离子峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积

为依据，采用外标法进行定量分析。

5试剂及材料

5.1试剂

试验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。试剂包括：

a)甲醇：色谱纯；

b)冰乙酸：分析纯；

c)浓盐酸：优级纯；

d)乙腈：色谱纯；

e)甲酸：优级纯；

f)0.1%甲酸溶液：移取0.1mL甲酸于100mL容量瓶中，用水定容至100mL；

g)1%乙酸甲醇溶液：移取1mL冰乙酸于100mL容量瓶中，用甲醇定容至100mL；

h)1%乙酸溶液：移取1mL冰乙酸于100mL容量瓶中，用水定容至100mL；

i)流动相：乙腈:0.1%甲酸水溶液（体积比90:10）；

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j)标准溶液：

1)1.0mg/mL标准物质溶液：根据河豚毒素标准物质的纯度，称取适量，用甲醇配制1mg/mL

河豚毒素标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期6个月。或采用市售标准溶液；

2)10.0µg/mL河豚毒素标准工作溶液：移取1.0mg/mL的河豚毒素标准物质溶液0.1mL于

10mL容量瓶中，用甲醇定容至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期3个

月。实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由1.0mg/mL标准物质溶液用甲醇稀释得到。

注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。

5.2材料

材料包括：

a)固相萃取柱：Oasis®MCX固相萃取柱或等效固相萃取柱，使用前依次用甲醇、水活化；

注：Oasis®MCX柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产

品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

b)一次性注射器；

c)有机系微孔滤膜：0.22µm；

d)具盖离心管；

e)具塞玻璃试管。

6仪器和设备

仪器和设备包括：

a)液相色谱-质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；

b)固相萃取仪；

c)电子天平；

d)鼓风恒温干燥箱；

e)浓缩器；

f)振荡器；

g)离心机；

h)移液器。

7操作方法

7.1定性分析

7.1.1样品提取

7.1.1.1检材样品提取

7.1.1.1.1血液、尿液固相萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL于具盖离心管中，加入1%乙酸甲醇溶液1.5mL，振荡，13000r/min

离心3min，取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中，控制上清液过柱流速为0.5mL/min，依次用1mL

乙腈、1mL甲醇、1mL水淋洗，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用0.2mol/L盐酸溶液/甲

醇（体积比为4：1）1mL洗脱，洗脱液置于浓缩器上60C浓缩至干，残留物用流动相200L溶解，

用有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器分析。

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7.1.1.1.2组织固相萃取

称取铰碎组织0.5g于具盖离心管中，用1%乙酸甲醇溶液1.5mL浸泡2h后，振荡，13000r/min离

心3min，取上清液转移至已活化好的固相萃取柱上，其余按照7.1.1.1.1操作。

7.1.1.1.3血液、尿液液液萃取

移取血液等液体检材样品1.0mL于具盖离心管中，加入1%乙酸甲醇溶液1.5mL，混匀后3500r/min

离心10min，取上清液，剩余检材再加入1%乙酸甲醇溶液1.5mL，再次提取，合并上清液。将上清液

在60℃浓缩器中用空气流吹干，残留物用1%乙酸溶液0.25mL复溶，再加入0.25mL氯