WS/T 454-2014 从业人员预防性健康检查 沙门菌、志贺菌检验方法

ICS13100

C51.

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T454—2014

从业人员预防性健康检查

沙门菌志贺菌检验方法

、

Preventivehealthexaminationofemployees—

ExaminationofSalmonellaandShigella

����

2014-05-08发布2014-10-01实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布

WS/T454—2014

目次

前言

…………………………Ⅰ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

定义术语和缩略语

3、………………………1

原理

4………………………2

设备和材料

5………………2

培养基和试剂

6……………3

检验程序

7…………………3

操作步骤

8…………………4

附录规范性附录沙门菌志贺菌荧光检测反应体系及注意事项

A()、PCR…………9

附录规范性附录标本混合方案

B()……………………11

WS/T454—2014

从业人员预防性健康检查

沙门菌志贺菌检验方法

、

1范围

本标准规定了粪便标本肛拭子中沙门菌和志贺菌的检验方法

()。

本标准适用于公共场所从业人员食品生产和加工食品生产人员食品流通和餐饮服务食品经

、()、(

营人员饮用水生产经营人员预防性健康检查项目中粪便标本肛拭子的沙门菌和志贺菌检验

)、、,()。

其他相关行业从业人员如从事医疗卫生用品生产经营人员以及化妆品生产人员等预防性健康

,、,

检查项目中粪便标本肛拭子的沙门菌和志贺菌检验可参照本标准执行

,()。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

食品微生物学检验沙门菌检验

GB4789.4—2010

食品卫生微生物学检验染色法培养基和试剂

GB/T4789.28—2003、

临床诊断中聚合酶链反应技术的应用

WS/T230—2002(PCR)

伤寒和副伤寒诊断标准

WS280

细菌性和阿米巴性痢疾诊断标准

WS287

3定义术语和缩略语

、

31术语和定义

.

下列术语和定义适用于本文件

。

311

..

从业人员预防性健康检查preventivehealthexaminationofemployees

对公共场所从业人员从事食品生产和加工食品生产人员食品流通和餐饮服务食品经营人

、()、()

员饮用水生产经营人员医疗卫生用品生产经营人员以及化妆品生产人员等按国家有关卫生法

,、,、。

律法规规定所进行的从业前从业期间的健康检查

、、。

312

..

实时荧光PCRreal-timePCR

实时荧光聚合酶链反应

。

313

..

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数

,。

32缩略语

.

下列缩略语适用于本文件

。

脱氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

羧基荧光素

FAM:6-(6-carboxyfluorescein)

1

WS/T454—2014

六氯甲基荧光素

HEX:-6-(Hexachlorofluorescein)

赖氨酸脱羧酶

LDC:(LysineDecarboxylase)

麦康凯琼脂

MAC:(MacConkeyAgar)

营养肉汤

NB:(NutrientBroth)

乙基苯基聚乙二醇

NP-40:(NonidetP-40)

亚硒酸盐胱氨酸

SC:(SeleniteCystine)

酶聚合酶

Taq:TaqDNA(TaqDNApolymerase)

三糖铁琼脂

TSI:(TripleSugarIronAgar)

酶尿嘧啶糖基酶

UNG:DNA(UracilDNAglycosylase)

木糖赖氨酸胆酸盐琼脂

XLD:--(Xylose-Lysine-Desoxycholate)

4原理

41筛查试验

.

依据核酸体外扩增基本原理针对沙门菌和志贺菌特异靶基因序列设计引物荧光标记探针在

,、,

反应过程中当荧光信号达到并超过所设定的阈值时利用荧光信号强度与产物量的正相关

PCR,,PCR

关系即可对结果进行分析和判定

,PCR。

对标本的模板进行实时荧光扩增根据其值及扩增曲线进行标本结果报告当

DNAPCR,Ct,PCR

结果呈阴性时直接报告阴性结果当结果呈阳性时进一步对阳性标本做确诊实验从而实现对

;PCR,。

从业人员健康检查粪便标本中的沙门菌和志贺菌的快速筛查

。

42确诊试验

.

筛查试验结果为阳性时依据确诊试验进行细菌培养和鉴定包括生化和血清学鉴定当

PCR,8.5,,

确诊试验鉴定结果为阳性时报告阳性为阴性时报告阴性

,。

5设备和材料

51实时荧光仪

.PCR。

52生物安全柜

.。

53高速离心机离心速度以上

.(12000r/min)。

54漩涡混匀器

.。

55恒温培养箱

.。

56冰箱和

.:2℃~8℃-20℃。

57电子天平感量

.:1mg。

58计或比色管或精密试纸

.pHpHpH。

59微量可调移液器和配套带滤芯吸头

.:2.5μL,10μL,100μL,200μL,1000μL。

510恒温金属浴水浴锅

./:25℃~100℃。

511采样管密闭式内径高度

.:,≥1.2cm,≥10cm。

512采样拭子长度

.:≥10cm。

513试管架

.。

514无菌吸管具刻度具刻度或微量移液器及吸头

.:1mL(0.01mL)、10mL(0.1mL)。

515无菌培养皿直径

.:90mm。

516无菌试管

.:3mm×50mm。

517废液缸

.。

2

WS/T454—2014

6培养基和试剂

61营养肉汤增菌液或其他有效增菌液按中规定

.(NB):GB/T4789.28—20034.8。

62木糖赖氨酸脱氧胆酸琼脂按中规定

.(XLD):GB4789.4—2010A.6。

63沙门菌显色培养基

.。

64麦康凯琼脂按中规定

.(MAC):GB/T4789.28—20034.24。

65三糖铁琼脂按中规定

.(TSI):GB/T4789.28—20034.26、4.27。

66亚硒酸盐胱氨酸增菌液按中规定

.(SC):GB4789.4—2010A.3。

67葡萄糖半固体发酵管按中规定

.:GB/T4789.28—20034.31。

68糖发酵管按中规定

.:GB/T4789.28—20033.2。

69赖氨酸脱羧酶试验培养基按中规定

.(LDC):GB/T4789.4—20