DB12/T 1019-2020 猪德尔塔冠状病毒 RT-PCR 检测方法
DB12/T 1019-2020 Pig Delta coronavirus RT-PCR detection method
基本信息
发布历史
-
2020年12月
研制信息
- 起草单位:
- 起草人:
- 出版信息:
- 页数:7页 | 字数:- | 开本: -
内容描述
ICS65.020.30
B41
DB12
天津市地方标准
DB12/T1019—2020
猪德尔塔冠状病毒RT-PCR检测方法
RT-PCRassayfordetectionofporcinedeltacoronavirus
2020-12-28发布2021-02-01实施
天津市市场监督管理委员会发布
DB12/T1019—2020
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。
本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。
本标准起草单位:天津市畜牧兽医研究所。
本标准主要起草人:李秀丽、鄢明华、郑丽、路超、田向学、张莉、李富强、江珊、任卫科、董志
民。
I
DB12/T1019—2020
猪德尔塔冠状病毒RT-PCR检测方法
1范围
本标准规定了猪德尔塔冠状病毒(porcinedeltacoronavirus,PDCoV)RT-PCR检测方法的原理、
仪器设备与试剂、样品对照、方法步骤和结果判定等技术内容。
本标准适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中PDCoV核酸的检测。
2缩略语
下列缩略语适用于本文件。
PDCoV:猪德尔塔冠状病毒(porcinedeltacoronavirus)
PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)
RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)
RNA:核糖核酸(ribonucleicacid)
DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)
cDNA:互补脱氧核糖核酸(complementaryDNA)
PK-15细胞:猪肾细胞(porcinekidneycell)
DEPC:焦炭酸二乙酯(diethylpyrocarbonate)
Taq酶:TaqDNA聚合酶(TaqDNApolymerase)
dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)
M-MLV:莫洛尼氏鼠白血病病毒(moloneymurineleukemiavirus)
PBS:磷酸缓冲液(phosphatebuffersolution)
TAE:Tris-乙酸电泳缓冲液(trisacetate-EDTAbuffer)
3原理
PDCoV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据PDCoVM基因保守基因
序列设计一对引物,在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以引物为延伸起点,通过变性、退火和延
伸,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。依据PCR试验结果,判断样品中是否含有PDCoV。
4主要仪器设备
生物安全柜、组织研磨机、涡旋振荡器、台式低温高速离心机、PCR
定制服务
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