GB/T 47130-2026 牛冠状病毒感染诊断技术

ICS11220

CCSB.41

中华人民共和国国家标准

GB/T47130—2026

牛冠状病毒感染诊断技术

Diagnostictechniquesforbovinecoronavirusinfection

2026-01-28发布2026-08-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T47130—2026

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范围

1………………………1

规范性引用文件

2…………………………1

术语和定义

3………………1

缩略语

4……………………1

临床诊断

5…………………2

样品的采集保存和运输

6、…………………3

实验室样品制备

7…………………………4

病毒分离培养

8……………4

间接免疫荧光

9……………6

荧光

10RT-PCR…………………………7

酶联免疫吸附试验

11(ELISA)……………9

综合判定

12………………10

附录规范性样品制备及病毒分离溶液的配制

A()……………………11

附录资料性正常细胞和感染后的细胞参照图

B()HCT-8BCoVCPE……………12

附录规范性间接免疫荧光试剂的配制

C()……………13

附录资料性单克隆抗体制备

D()………………………14

附录资料性间接免疫荧光结果判定参考图

E()………15

附录规范性核酸提取溶液的配制

F()…………………16

附录资料性荧光扩增序列及引物探针的位置和蛋白的核苷酸序列

G()RT-PCR、S……………17

附录规范性酶联免疫吸附试验包被抗原的制备

H()…………………18

附录规范性标准阳性血清及阴性血清的制备

I()BCoV……………19

附录规范性酶联免疫吸附试验溶液的配制

J()………20

Ⅰ

GB/T47130—2026

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由中华人民共和国农业农村部提出

。

本文件由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本文件起草单位中国质量检验检测科学研究院南京农业大学中牧实业股份有限公司中国动物

:、、、

卫生与流行病学中心西南民族大学中国海关科学技术研究中心中国动物疫病预防控制中心中国农

、、、、

业科学院北京畜牧兽医研究所

。

本文件主要起草人吴绍强冯春燕王彩霞杨振肖进张蕾宋芳李卫华张斌林祥梅于浩洋

:、、、、、、、、、、、

王慧煜陈冬杰梅琳李昊轩史喜菊孙雨于宁卫贾红

、、、、、、、。

Ⅲ

GB/T47130—2026

引言

牛冠状病毒感染是由牛冠状病毒引起的一种以腹泻为主要症状的消

(Bovinecoronavirus,BCoV)

化道疾病常引起新生犊牛腹泻和成年牛冬季腹泻也可能引起呼吸道疾病我国将牛冠状病毒感染列

,,。

为三类动物疫病为单股正链病毒属套式病毒目冠状病毒科

。BCoV、RNA,(Nidovirales)、(Coronavi-

乙型冠状病毒属Betacoronavirus病毒粒子呈多边形或球形直径从到

ridae)、()。BCoV,80nm160nm

不等平均直径为有囊膜病毒表面有两种棒状突起核衣壳螺旋状对称在自然界中

,120nm,,,。BCoV

感染活力持续左右一年四季均易感染但冬季的感染率相对较高临床中常与轮状病毒等

3d,,。BCoV

消化道病原混合感染从而加重病情

,。

主要感染牛亦可能跨种传播给长颈鹿羊驼驯鹿白尾鹿羚羊麋鹿和水鹿等其他反刍动

BCoV,、、、、、

物感染带毒牛是本病自然流行的主要传染源犊牛一旦感染可大量排毒痊愈牛仍可在一段时间内

。,,,

通过鼻腔或粪便持续排毒成为病毒携带者痊愈牛体内有该病毒的抗体约产生长达年年的免

,。,1~3

疫力该病的实验室检测技术除了传统的病毒分离鉴定和电镜观察外还有多种血清学检测技术和分

。,

子生物学检测技术目前尚无治疗感染的特效药物疫苗接种和科学防控是预防感染的

。BCoV,BCoV

主要措施

。

Ⅳ

GB/T47130—2026

牛冠状病毒感染诊断技术

1范围

本文件描述了牛冠状病毒感染的临床诊断样品采集保存与运输实验室样品制备以及病毒分离培

、、

养间接免疫荧光荧光酶联免疫吸附试验等实验室诊断方法

、、RT-PCR、(ELISA)。

本文件适用于牛冠状病毒感染的疫病诊断流行病学调查以及检疫等

、。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

兽医诊断样品采集保存与运输技术规范

NY/T541、

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义

。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

二喹啉甲酸

BCA:(Bicinchoninicacid)

牛冠状病毒

BCoV:(Bovinecoronavirus)

黑洞淬灭剂

BHQ1:(Blackholequencher1)

碱基对

bp:(Basepair)

牛血清白蛋白

BSA:(Bovineserumalbumin)

互补脱氧核糖核酸

cDNA:(Complementarydeoxyribonucleicacid)

致细胞病变效应

CPE:(Cytopathiceffect)

阈值循环数

Ct:(Cyclethreshold)

二脒基苯基吲哚

DAPI:4',6--2-(4',6-diamidino-2-phenylindole)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(Diethylpyrocarbonate)

脱氧核糖核苷三磷酸混合物

dNTPs:(Deoxy-ribonucleosidetriphosphatemixture)

乙二胺四乙酸

EDTA:(Ethylenediaminetetraaceticacid)

酶联免疫吸附试验

ELISA:(Enzymelinkedimmunosorbentassay)

羧基荧光素

FAM:(Carboxyfluorescein)

胎牛血清

FBS:(Fetalbovineserum)

异硫氰酸荧光素

FITC:(Fluoresceinisothiocyanate)

次黄嘌呤氨基蝶呤和胸腺嘧啶脱氧核苷

HAT:(Hypoxanthine)、(Aminopterin)(Thymidine)

1