LY/T 2350-2014 松褐天牛携带松材线虫的PCR检测技术规范

ICS65.020

B65

中华人民共和国林业行业标准

/—

LYT23502014

松褐天牛携带松材线虫的PCR检测

技术规范

ㅤㅤㅤㅤ

TechnicalreulationfordetectinBursahelenchusxlohilusfrom

ggpyp

()

PinesawerMonochamusalternatusHoebPCRamlification

ypyp

2014-08-21发布2014-12-01实施

国家林业局发布

/—

LYT23502014

松褐天牛携带松材线虫的PCR检测

技术规范

1范围

本标准规定了松褐天牛()成虫携带松材线虫[

MonochamusalternatusHoeBursahelenchus

pp

()]检测技术的一般原则和技术要求。

xlohilusSteineretBuhrerNicklePCR

yp

本标准适用于利用PCR技术定性检测携带松材线虫的松褐天牛。

2规范性引用文件

。,

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,()。

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

/—分析实验室用水规格和试验方法

GBT66822008

/—、

GBT211072007动物源性饲料中马驴源性成分定性检测方法PCR方法

3术语和定义

ㅤㅤㅤㅤ

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

松褐天牛

MonochamusalternatusHoe

p

,(),(),(),

又名松墨天牛属昆虫纲Insecta鞘翅目Coleotera天牛科Cerambcidae墨天牛属

py

(),,。

Monochamus是松树的一种重要蛀干害虫又是松材线虫的主要传播媒介松褐天牛成虫中后胸携

。。

带较多松材线虫松褐天牛成虫形态图和脱翅松褐天牛成虫中后胸示意图参见附录A

3.2

松材线虫Bursahelenchusxlohilus

pyp

(),(),(),

松材线虫隶属于线虫纲Nematoda滑刃目Ahelenchida滑刃亚目Ahelenchina滑刃总科

pp

(),滑刃科(),伞滑刃亚科(),伞滑刃属

AhelenchoidoideaParasitahelenchidaeBursahelenchinae

ppp

(),,。

Bursahelenchus是引起松树枯萎死亡的直接原因也是本标准所要检测的目标

p

3.3

聚合酶链式反应;

olmerasechainreactionPCR

py

,,、

聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法由高温变性低温退火及适温延伸

,,,、、

等几步反应组成一个周期循环进行使目的DNA得以迅速扩增具有特异性强灵敏度高操作简便

。/—。

和省时等特点参见中的规定

GBT2110720073.1

3.4

引物rimer

p

。,,

一段短核苷酸序列其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点在聚合反应时刺激合成一条与模板

互补的DNA的序列。

3.5

内部转录间隔区internaltranscribedsacer

p

,()()

简称ITS位于核糖体小亚基18SrDNA和大亚基28SrDNA基因保守序列区之间的核苷酸

1

/—

LYT23502014

,。

序列包括和

ITS1ITS2

3.6

阳性对照ositivecontrol

p

,。

试验的一个控制处理用于检验试验本身的正确与否即在用分子生物学技术手段对物种进行检

,。

测鉴定时一个试验处理的模板为该物种的DNA

3.7

阴性对照neativecontrol

g