DB32/T 3680-2019 玉米粗缩病病原免疫斑点检测方法

ICS65.020.20

B16

DB32

江苏省地方标准

DB32/T3680—2019

玉米粗缩病病原免疫斑点检测方法

ThedetectionofpathogenforMaizeRoughDwarfdiseasebydotimmuobinding

assaymethod

2019-12-04发布2019-12-25实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3680—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由江苏省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准主要起草人：周彤、杜琳琳、周益军、孙枫、兰莹、李硕、范永坚。

I

DB32/T3680—2019

玉米粗缩病病原免疫斑点检测方法

1范围

本标准规定了大麦、小麦、玉米植株和灰飞虱携带玉米粗缩病病原免疫斑点检测方法。

本标准适用于大麦、小麦、玉米植株和灰飞虱携带玉米粗缩病病原的检测。

2斑点酶联免疫吸附检测原理

硝酸纤维素膜具有很强的静电吸附力，中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。将抗原吸

附于硝酸纤维素膜后，可利用膜作为固相载体进行抗原抗体反应。当加入抗原的特异性抗体后，即可与

膜上的抗原结合，然后再加入带有标记物的二抗，使酶标记通过二抗和相应抗体的结合间接地交联于纤

维素膜上。最后加入标记物相应的底物后，标记物即可与底物作用形成不溶性产物，呈现斑点状着色。

3仪器设备与试剂材料

3.1仪器设备

台式离心机（5000r/min）；具盖塑料离心管：200µL；培养皿（直径为90mm）；塑料盒（规格

为100mm×50mm）。

3.2试剂材料

3.2.1试验用水均为蒸馏水，使用的化学试剂未作说明均为分析纯级别。

3.2.2包被缓冲液：0.05mol/L，pH值9.6。称取1.59gNa2CO3和2.93gNaHCO3，加水定容至1000mL，

用HCl调pH值至9.6，4℃保存。

3.2.3磷酸盐Tween20缓冲液（0.01MPBST）：0.01mol/L，pH=7.5。称取40gNaCl,1gKCl,1gKH2PO4

和15gNa2HPO4，加水定容至5000mL，用H