WS/T 355-2011 血清甘油三酯的酶法测定

ICs11.020

C50

中华人民共和国卫生行业标准

—ˉ

Ws/T355ˉ2011

血清甘油三酯的酶法测定

GuideIinesforenzy口

natiCmeasurementsofseruⅡ

ltriglycerides

2011-12-14.发布2012-o6-o1

实施

中华人民共和国卫生部发布

Ws/T355-ˉ2011

目刂舀

本标准按照GB/T1.⒈2009给出的规则起草。

本标准参医《

考中华学会验学血》

检会脂测定推法、医

荐方中华学会检验分会血脂专家委员会《于

关

临血脂测定》。

床的建议制定

本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。

本标准起草单位:卫生部北京老年医学研究所。

本标准起人:王、、。

草抒董军陈文祥

Ws/T355—

2011

血清甘油三酯的酶法测定

1范围

本标准规定了血清甘油三酯酶法测定及其质量保证的基本原则。

本标准适用于临床实验室和流行病学及营养调查中的血清甘油三酯测定。生产厂商制备甘油三酯

酶法测定试剂盒也可参照使用。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文仵。

2.1

分析系统ana1yticaIsystem

对某检验项目在规定浓度范围内,给出分析结果的一组按规定条件使用的仪器和装置,包括试剂和

物品。

E改自ISo/IEC导99:2007,3.2测measuHngsystem]

则量系统

注1:对于临生,分

床物化学检验析系统主要由按规定条件使用的、

仪器试剂和校准物组成。

“”

注2:其他标准(如GB/T22576—2008)中的类似概念为检验程序,但检验程序包括更广泛内容,对于本标准,分

析系统相当于检验程序的分析部分。

2.2

验证verification

提供客观证据,考虑任何测量不确定度,说明给定事物满足规定要求。

[ISO/IEC导则99:2007,2.44]

注1:本标准主要是指分析系的证,即某

统验分析系统在本实验室的性能是否与规定性能指标或厂商提供的性能

指标一致。

“”“”

2:有(validao°

注概rl,,即

关念是确认规定要求满足指定用的证,本证

途验标准的验包含确认的含义。

2.3

甘油三酯trigIyceride

甘油三酯是指甘油的三脂肪酸酯,形成甘油三酯的脂肪酸有多种,因此甘油三酯是一组化合物,而

不是分子组成和结构固定的单一化合物。此外,血中还存在少量甘油二、(正

酯甘油一酯和游离甘油常

情况下甘油二酯和甘油一酯之和不足甘油三酯的3%,游离甘油约0.11mmo1/L)。三

甘油酯重量多以

三油酸甘油酯(相对分子质量885.5)计。

3方法概述

3.1总甘油测定

目前,临床实验室普遍采用酶法测定血清甘油三酯。首先,用脂肪酶水解甘油三酯为甘油和脂肪

酸,然后,以多种方法测定其中的甘油部分。通常先用甘油激酶和三磷酸腺苷(ATP)将甘油磷酸化,生

成磷酸甘油或二磷酸腺苷(ADP),用氧化酶或脱氢酶检测磷酸甘油,也有用丙酮酸激酶检测ADP。多

数情况下测定的结果是总甘油,即包括甘油三、二、一

酯甘油酯甘油酯和游离甘油之和。

、Vs/T355-ˉ

2011

3.2去除游离甘油的方法

需要除去游离甘油时,常用以下两种方法:

外游离甘油空白法:分别用含脂肪酶和不含脂肪酶的试剂分析样品,以测定样品的总甘油和游

离甘油,自总甘油中减去游离甘油得甘油三酯;

b)内游离甘油空白法,有两种基本模式:

1)将试剂中的脂肪酶与其他试剂成分分开,样品先与不含脂肪酶的试剂混合,温育后测定吸

光度,加入脂肪酶并温育后再测定吸光度,用两吸光度之差计算甘油三酯浓度,多见于使

用NAD/NADH氧还反应的方法;

2)仅限于使用Trinder反,第一

应的方法步试剂除不含脂肪酶外,也不含⒋,

氨基安替比林

将样品与第一试剂混合并温育一定时间后,加人含脂肪酶和4-氨基安替比林的第二试剂

温育后测定,由于第一步反应系统中不含脂肪酶及⒋基,游

氨安替比林离甘油产生的过氧

化氢在过氧化物酶的作用下与另一色原(酚类化合物)反应产生无色物质,因此在加人第

二试剂之前不需测定吸光度;第二步反应中的脂肪酶可有效消除乳糜样品的混浊,且

TⅡnder反500nm以

应产物的最大吸收波长多在上,可只做试剂空白,样品混浊对测定

结果影响较小。内游离甘油空白法不增加样品和试剂用量,但试剂需分两步加人,也不能

获得样品的游离甘油含量。

4分析系统

4.1酶试剂

选用的血清甘油三酯酶法测定试剂盒中的酶试剂应能符合以下质量要求:

——能水解99%以上的血清甘油三酯;

——

特异性高,干扰因素少;

——在37℃与血清反应达终点所需时间小于5mh,终时60min;

点吸光度至少能稳定

—

——Omm°

在血清甘油三酯浓度l/L~11.29mmol/L(Omg/dL~1000mg/dL)范

围内,吸光度与

浓度呈通过原点的直线关系;

——

试剂溶液在测定波长下的吸光度小于0.05;

——在规定温度下保持稳定1年;

——

试剂批间差小于1%。

4,2校准物质和质控物

酶法测定甘油三酯使用的校准物和质控物应符合如下要求:

——

可使用血清校准物,在测定总甘油的方法中也可使用甘油水溶液校准物;

ˉ——

使用校准物的甘油三酯浓度应在我国人血清甘油三酯水平高低划分界限(见附录A)附近,在

所选用的试剂、器(见

仪条件下能使新鲜样品测定结果可溯源到甘油三酯参考系统附录B);

——使用时应将校准物的温度升至室温并充分混匀。冰冻融化后的血清校准物质可于2℃~8℃

3d,不

贮存可反复冻融;

——

制备质控物应认真选择原料和工艺,使其具有与样品相同或相似的物理、,贮

化学性质存于

—⒛℃以下;如果是冰冻或冻干血清制备的质控物质融化或复溶后应使其温度升至室温,充

分均匀;融化后的质控物质可于2℃~8℃