DB22/T 2705-2017 牛瑟氏泰勒虫病检测方法 LAMP法

ICS11.220

B41

备案号：56318-2017DB22

吉林省地方标准

DB22/T2705—2017

牛瑟氏泰勒虫病检测方法LAMP法

LAMPassayfordetectionofbovineTheileriasergenti

2017-09-30发布2017-11-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2705—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2015给出的规则起草。

本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：延边大学、吉林省动物疫病预防控制中心、延边朝鲜族自治州畜牧总站。

本标准主要起草人：贾立军、张守发、梁晚枫、柴方红、张魁、王海军。

I

DB22/T2705—2017

牛瑟氏泰勒虫病检测方法LAMP法

1范围

本标准规定了牛瑟氏泰勒虫病LAMP检测方法的技术要求。

本标准适用于牛瑟氏泰勒虫病原检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

3.1

瑟氏泰勒虫病theileriasergenti

由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫寄生于牛体内引起的以高热、贫血、出血、消瘦和体表淋巴结肿大

为主要临床症状的一种血液原虫病。

4原理

环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplificationLAMP)：针对靶基因的6个区域设计4

种特异性引物，利用一种链置换DNA聚合酶在62℃～65℃等温条件下，保温30min～60min，使得链

置换DNA合成在不停地自我循环，即而完成的核酸扩增反应。

5试剂和溶液

除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682中一级水的要求。

5.1试剂

5.1.1BstDNAPolymerase。

5.1.2SYBRGreenⅠ。

5.1.3限制性内切酶TaqⅡ。

5.1.4血液DNA提取试剂盒。

5.1.5溴化乙锭。

5.1.6DNAMarker分子量标准。

5.2常规试剂配制

1

DB22/T2705—2017

5.2.1100mg/mL溶菌酶见附录A.1。

5.2.210mg/mL蛋白酶K见附录A.2。

5.2.310%十二烷基磺酸钠见附录A.3。

5.2.45%十六烷基三甲基溴化铵见附录A.4。

5.2.5TE（pH8.0）见附录A.5。

5.2.650×TAE缓冲液见附录A.6。

5.2.7加样缓冲液见附录A.7。

5.2.81.5%琼脂糖凝胶的制备见附录A.8。

5.3引物

LAMP反应引物序列与浓度见表1。

表1LAMP特异性引物序列及浓度

引物引物序列DNA序列浓度

F3TCGCCCACAGACTTAAGCA0.2µmol/L

B3GAATGGTCCGACGAAGTCATP33基因0.2µmol/L

FIPGTGCATATCCGAACTGAACCCACTCATGCCAAGCCACTCT（D87198）1.6µmol/L

BIPAGGAAACCAAGGATCTCGATGCGGCATCAGCAGCAAAAAGAC1.6µmol/L

5.4仪器设备

5.4.1低温高速离心机，12000r/min。

5.4.2恒温水浴锅，室温～100℃。

5.4.3分析天平，感量0.1mg。

5.4.4电泳槽，水平电泳槽。

5.4.5电泳仪，电压1V～300V，电流1mA～400mA。

5.4.6凝胶成像系统