GB/T 34756-2017 猪轮状病毒病 病毒RT-PCR检测方法

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中华人民共和国国家标准

GB/T34756—2017

猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法

Porcinerotavirusdisease—RT-PCRfordetectingvirusacid

2017-11-01发布2018-05-01实施

发布

GB/T34756—2017

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAT/TC181)归口。

本标准起草单位:东北农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、河南牧业经济学院。

本标准起草人:乔薪環、邵卫星、魏荣、崔文、唐丽杰、李一经、姜艳平、孙映雪、李卫华、徐耀辉。

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GB/T34756—2017

猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪轮状病毒RT-PCR检测方法的试剂、仪器设备、操作程序。

本标准适用于猪临床样品(新鲜粪便和小肠)及细胞培养物中猪轮状病毒核酸的检测。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AMV：鸟类RNA病毒反转录酶(avianmyeloblastosisvirus)

bp：碱基对(basepair)

DEPC:焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate)

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

dNTPs:脱氧核糖核昔三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphates)

PBS：磷酸盐缓冲液(phosphate-buffercdsalinebuffer)

PCR：聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)

RRI：RNA酶抑制剂(RNaseribonucleaseinhibitor)

RT：反转录(reversetranscriptase)

RT-PCR:反转录-聚合酶链式反应(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)

Tag酶：TagDNA聚合酶(TagDNApolymerase)

3试剂

除另有规定外，所用试剂应为分析纯。提取病毒RNA所用试剂应使用无RNA酶的容器进行

分装。

3.1氯仿:常温保存。

3.2异丙醇。

3.375%乙醇。

3.4二乙基焦磷酰胺(DEPC)0

3.5Tag酶。

3.6AMVO

3.7DNA分子量标准(DL2000bp)o

3.8电泳缓冲液(TAE)(配制见A.l)0

3.91.5%琼脂糖(配制见A.3)。

3.10猪轮状病毒阳性样品及阴性样品(见附录B)。

4仪器设备

4.1高速冷冻离心机。

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GB/T34756—2017

4.2PCR扩增仪。

4.3核酸电泳系统。

4.4恒温水浴锅。

4.5冰箱（2°C〜8°C、一20°C）。

4.6凝胶成像系统（或紫外透射仪）。

4.7组织匀浆器或研钵。

4.8二级生物安全柜。

4.9微量加样器（0.5卩L〜10卩L；2卩L〜20心20“L〜200ptL；100“L〜1000卩L）。

5操作程序

5.1样品的采集、运输和处理

5.1.1样品采集和运输

采集腹泻急性期的小肠（5.0cm〜10.0cm）或新鲜粪便（5.0g〜10.0g）,放到密封袋中，置于带有冰

袋的保存箱中，送