DB5304/T 001-2019 草莓脱毒瓶苗生产技术规范

ICS65.020.20

B39

DB5304

玉溪市地方标准

DB5304/T001—2019

DG5304/T001-2015

草莓脱毒瓶苗生产技术规范

2019–11–25发布2020–02–24实施

玉溪市市场监督管理局发布

DB5304/001—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定起草。

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由玉溪市农业农村局归口。

本标准起草单位：玉溪市农业科学院。

本标准主要起草人：张军云、张钟、李晓亮、王文智、杨世先、张建康、张翠萍、陈桂芬、段永华、

龚跃华、邓成忠、廖凯。

I

DB5304/001—2019

草莓脱毒瓶苗生产技术规范

1范围

本标准规定了草莓脱毒瓶苗生产的术语和定义、组培工厂的设计要求和所需仪器设备及化学试剂、

培养基的配制、消毒灭菌操作、接种操作、培养室操作、组培苗生产流程和脱毒瓶苗出苗标准等。

本标准适用于玉溪市草莓脱毒瓶苗生产。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1

植物组培

植物组织培养的简称，在无菌条件下，将离体的植物器官（如根、茎、叶、花、果实、种子等）、

组织（如形成层、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）或原生质体等，培养在人工配制的培养

基上，在一定的光照和温度条件下，使之生长、分化并发育成完整小植株的培养技术。

2.2

草莓茎尖脱毒组培技术

根据植物病毒在植物体内分布的不均性，越接近茎尖生长点（约0.1～1毫米区域），病毒浓度越

稀或接近无病毒的原理，采用草莓茎尖处较小的生长点通过离体植物组织培养达到脱除植物病毒的技

术。

2.3

组培苗（瓶苗）

经植物组织培养获得的根茎叶齐全的瓶装生根苗。

2.4

组培室

采用植物组织培养技术，生产植物组培苗的车间。

2.5

外植体

指用于植物组织培养的植物体或一部分器官、组织、细胞及细胞器。

2.6

1

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植物激素

调节植物生长发育的物质，对植物的生长、发育、衰老、休眠、抗逆性具有极其重要的作用，组织

培养常用的植物激素有生长素、细胞分裂素。

2.7

培养基

在植物组织培养过程中，根据不同植物营养所需求，由人工配制的提供培养材料生长所必需的营养

元素和某些植物生长物质的基质。

2.8

培养材料

生长在培养容器中的培养基上的无菌植物材料。

2.9

接种

将灭菌后的外植体或培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。

2.10

初代培养

指将灭菌后的外植体接种在无菌培养基中获得无菌材料和无性繁殖系前的最初几代培养。

2.11

诱导培养

将灭菌后的外植体或培养材料接种到培养基中进行培养使其生长发育的过程。

2.12

继代培养

培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪截等操作后转接入新鲜培养基中继续培养的过程。

2.13

增殖培养

继代培养材料产生出不定芽或新的组培苗的过程。

2.14

培养代数

同一培养材料经继代培养的次数。

2.15

繁殖倍数

2

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一个培养周期内不定芽增殖倍数，即培养一个周期后增殖的不定芽数/接种时的不定芽数。

2.16

生根培养

把不定芽转移到生根诱导培养基中诱导生根，形成完整植株的过程。

2.17

组培室

进行植物组织培养技术研究和组培苗生产的场所，包括洗涤室，培养基配制室，灭菌室，接种室和

培养室等部分。

2.18

洗涤室

洗涤各种玻璃器皿、培养瓶和各种用具以及进行植物材料预处理的场所。

2.19

培养基配制室

配制化学试剂、培养基母液、培养基以及分装培养基和蒸馏水等的场所。

2.20

灭菌室

进行培养基、无菌水和器械等高压灭菌的场所。

2.21

接种室

接种室也称无菌操作室，是外植体的灭菌、培养材料的接种、转移、继代增殖、生根等无菌操作工

作的场所。

2.22

培养室

培养材料和组培苗在人工控制温度、相对湿度和光照等条件下培养和生长的场所。

3组培工厂的设计要求、所需仪器设备及化学试剂

3.1设计要求

3.1.1组培工厂应建在排水设施良好，常年主风向的上风区。应远离各种污染源（如粉尘大的工厂、

微生物工厂和繁忙交通干道），周边环境应干燥、安静、通风透光、空气清新。

3.1.2组培工厂设计包括组培车间：洗涤室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、办公室等。

3

DB5304/T001—2019

3.1.3新建组培工厂地基应高出地面30厘米以上，楼顶不应有渗漏；若建两层或三层，洗涤室、培养

基配制室、灭菌室宜安排在楼下，接种室、培养室应防潮、隔热保温，宜安排在二楼、三楼。

3.1.4利用办公室、仓库等旧房进行改造的组培工厂，应合理安排，做到杜绝污染，方便工作，节省

能源，使用安全。

3.1.5组培工厂各分区要布局合理，应根据生产工艺流程，把各部分安排成一条连续、有序和通畅的

生产流水线。

3.2生产设备

3.2.1洗涤设备

工厂化生产可选用自动或半自动洗瓶机或人工洗涤，配洗涤室水槽、塑料盆、塑料桶、塑料箱等。

3.2.2灭菌设备

高压蒸汽灭菌锅（大型卧式、中型立式、小型手提式）、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、臭氧发生

器、除湿器等。

3.2.3接种设备及工具

无菌超净工作台、镊子、剪刀、解剖刀、手术刀、酒精灯等。

3.2.4培养设备

培养容器（三角瓶、罐头瓶、专制塑料瓶、试管等）、培养架、空调、除湿机、光照培养箱等。

3.2.5实验设备

冰箱、蒸馏水器、电子天平、pH试纸、温湿度表、盛装器皿（烧杯、试剂瓶等）、计量器皿（量

筒、容量瓶、移液管等）以及其他实验室常用器具等。

3.2.6脱毒设备

体视显微镜、解剖镜、高倍显微镜、电热恒温水浴锅、光照培养箱等，有条件的还可购置显微照

相设备、测微尺等。

3.3常用化学试剂

组培中常用的无机盐类、有机物类、植物生长物质、消毒剂等参见附录A。

4培养基的配制

4.1MS基本培养基母液的配制

表1MS基本培养基的配制比例表

编规定量扩大母液配制1升培养基吸

母液成分称取量（mg）

号(mg/L)倍数体积（ml）取量定容

4

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硝酸钾KNO319001019000

硝酸铵NH4NO316501016500

1大量1000

硫酸镁MgSO4·7H2O370103700

元素100

磷酸二氢钾KH2PO4170101700

2氯化钙CaCl2·2H2O4401044001000100

硫酸锰MnSO4·4H2O22.31002230

硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6100860

硼酸H3BO36.2100620

3碘化钾KI0.8310083

微量

钼酸钠Na2MoO4·7H2O0.2510025

元素