GB/T 23239-2009 伊氏锥虫病诊断技术

ICS11.220

B41

中华人民共和国国家标准

GB/T23239—2009

伊氏锥虫病诊断技术

DiagnostictechniquesforTrypanosomosisevansi

2009-03-09发布2009-05-01实施

发布

GB/T23239—2009

刖

本标准的制定参照了世界动物卫生组织（OIE）编写的《陆生动物诊断试验和疫苗手册（哺乳动物、

禽鸟与蜜蜂）》（第五版,2004）。

本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国农业科学院上海兽医研究所。

本标准主要起草人：周金林、沈杰"

T

GB/T23239—2009

伊氏锥虫病诊断技术

1范围

本标准规定了新鲜血片、薄血涂片染色、毛细管集虫、实验动物接种等病原鉴定方法和乳胶凝集试

验、间接血凝试验和酶联免疫吸附试验等血清学试验技术。

本标准适用于伊氏锥虫病的诊断、检疫、流行病学调查。

2临床诊断

依家畜种类不同，临床症状表现不同。马（骡、驴）一般呈急性经过，感染后，体温突然升高到40C

以上，稽留数日，而后经短时间的间隙，再行发作，体表水肿为常见症状，结膜和第三眼睑常有出血斑。

黄牛、水牛及骆驼等一般呈慢性经过，有不定期的间歇发热，食欲不振，消瘦，肿脚和耳、尾干枯症状，许

多慢性感染病例无明显病变。

有以上临床症状者，可以怀疑感染，确诊需要实验室检验。

3病原鉴定

3.1采血样

可从耳静脉或尾静脉采取外周血，从颈静脉或其他大静脉采取深部血液，因伊氏锥虫喜欢寄生于深

部血液，处于低虫血症时，外周血检出率常低于深部血的50%。

3.2新鲜血片检查

在干净载玻片上滴上一小滴鲜血，盖上盖玻片，使血液扩散成为细胞单层，再用光学显微镜（200倍）

观察活动锥虫。为防止血液在观察时干涸，也可先在载玻片滴血吋加一滴生理盐水或3%柠檬酸三钠

生理盐水。

3.3薄血膜染色检查

将一小滴血放在清洁载玻片一端约20mm处，按常用方法推成薄血膜，迅速风干，用甲醇固定

2min,干燥后，再加姬氏染色液（配法参见附录A）染色25min,倾去染色液，自来水冲洗，干燥后用

400倍〜1000倍显微镜检查。

3.4毛细管集虫检查

3.4.1材料准备

肝素处理过的毛细管（管内径1.5nrni,长75mm的玻璃或无色透明的硬质塑料管，在拟进血的一

端吸入3%肝素钠10rmn,用烤箱70€-80C烤干后备用），显微镜一台，离心机一台，载玻片，盖玻

片，12号以上注射针头（或金属针），塑泥（橡皮泥）。

3.4.2采集待检血样

从动物耳静脉或尾静脉穿刺获得血液。先用酒精棉擦净拟采血处皮肤，干后用针头穿刺血管，血流

出吋用毛细管吸入达40rmn深（即70卩L血），封闭未沾染血的另一端（可用塑泥或火焰加热封闭）。

3.4.3集虫

以3000g离心10min,待红细胞全部沉积于毛细管下半部，上层为黄色血浆时即可。

3.4.4检查

在毛细管的血浆与红细胞分界线下1nwi处将管折断（切断、剪断），将带有少量红细胞的血浆滴于

载玻片上，盖上盖玻片，使血液扩散成细胞单层。在350倍〜400倍放大的光学显微镜下检查活锥虫，

如需进一步详细观察虫体，可再除去盖玻片，晾干血片后，用姬氏染色液染色后，在800倍〜1500倍放

大的显微镜下观察确定。

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GB/T23239—2009

3.5动物接种

采被检动物血0.25niL,加入灭菌阿氏液（或3%柠檬酸三钠生理盐水）0.25mL,经腹腔注射入小

白鼠（大白鼠则加倍量），每周3次从尾部采血检查活寄生虫，为提高锥虫在小鼠体内培养繁殖的敏感

性，可用环磷酰胺或醋酸氢化可的松抑制小白鼠的免疫力。