DB62/T 2786-2017 河北杨组织培养技术规程

ICS65.020.40

B61

DB62

甘肃省地方标准

DB62/T2786—2017

河北杨组织培养技术规程

TechnicalregulationsofPopulushopeiensistissueculture

2017-06-22发布2017-07-31实施

发布

DB62/T2786—2017

前言

本标准按GB/T1.1-2009的规定进行编写。

本标准由甘肃省林业厅提出并归口。

本标准主要起草单位：甘肃农业大学。

本标准参加起草单位：甘肃省林木种苗管理局。

本标准主要起草人：苏世平、李毅、王桑、单立山、种培芳、马彦军。

I

DB62/T2786—2017

河北杨组织培养技术规程

1范围

本标准规定了河北杨（PopulushopeiensisHuetChow）组织培养中外植体的选择及消毒、培养基的

配制、试管苗培养、组培苗炼苗、移栽等技术。

本标准适用于河北杨组培苗木的快繁生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T2289林木种苗生产经营档案

3术语与定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

外植体explant

用于组织培养的植物营养器官或组织片段，包括完整植株、胚胎或从植物体上切取的器官、组织、

细胞、原生质体等一切材料。

3.2

污染contaminate

培养基或培养材料遭受真菌或细菌等微生物侵染的现象。

3.3

母液stocksolution

为称量准确和方便，将培养基的成分配制成一定浓度和比例的溶液或混合溶液。

3.4

光培养lightculture

在光照条件下进行的培养。通常的植物组织培养，每天均需要12h~16h的光照。

3.5

暗培养darkculture

在无光照条件下进行的培养。外植体培养初期或愈伤组织再生时，有些植物需要暗培养。

3.6

启动培养initiationculture

将植物体上分离下来的外植体进行最初几代培养的过程。其目的是建立无菌培养物，诱导腋芽或顶

芽萌发，或产生不定芽、愈伤组织、原球茎。

3.7

增殖培养multiplicationculture

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离体芽苗、愈伤组织或悬浮培养细胞不断倍增的培养过程。

3.8

生根培养rootingculture

诱导无根离体试管苗产生根的培养过程。

3.9

瓶苗（试管苗）tubeseedling

通过植物组织培养产生的离体小植株。

3.10

炼苗acclimatization

将组培苗连同培养容器一起移至室外，打开瓶塞，置于近自然环境中培养，提高苗木的木质化程度，

增强苗木对自然光照和温差变化适应能力的过程。

3.11

移栽（移植）outplanting

将组培苗种植到温室或苗圃，并使苗木逐渐适宜自然条件的过程。

4外植体获取及消毒

4.1外植体母树的选择

母树应是生长健壮、无病虫害的个体。

4.2外植体获取

4.2.1休眠芽水培获取

河北杨休眠后，取生长健壮，无病害的一年生或两年生枝条，去除花芽，每枝条保留10个叶芽。将

枝条置于盛有灌溉用水的容器中，剪口插入水中5cm~10cm，每隔2d~3d换水一次。待水培枝条长出幼

芽，长3cm~5cm时，进行取材。

4.2.2休眠芽直接获取

在河北杨休眠后，剪取生长健壮，无病害的一年生枝条，去除花芽，每枝条保留10个叶芽，之后剪

成3cm~5cm的小段，每段包含2个~3个叶芽。

4.2.3萌发枝直接获取

选择生长健壮，长势好的嫩茎，长3cm~5cm，剪除叶片。

4.3外植体消毒

4.3.1水培芽、萌发枝消毒

水培芽和萌发枝用洗衣粉水刷洗后，10%的84消毒液消毒8min~12min，蒸馏水清洗，在超净工作

台上置75%酒精浸泡1s~2s，无菌水冲洗3次~4次，0.1%HgCl2溶液消毒5min~8min，无菌水冲洗3次~4

次，每次1min~2min，置于无菌纱布晾干备用。

4.3.2休眠芽消毒

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将休眠芽用洗衣粉水刷洗后，10%的84消毒液消毒20min~30min，蒸馏水清洗，在超净工作台上

置75%酒精浸泡1s~2s，无菌水冲洗3次~4次，0.1%HgCl2溶液消毒10min~15min，无菌水冲洗3次~4次，

每次1min~2min，置于无菌纱布晾干备用。

5培养基配制

5.1培养基养分

培养基养分包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、植物生长调节剂、蔗糖以及琼脂等。

5.2母液配制

5.2.1母液成份

母液成份参见附录A，配制好的母液，保存时间不得超过15d。

5.2.2溶剂选择

母液溶剂应选用无菌水配制。

5.2.3大量元素母液配制

大量元素母液各组分的浓度应与培养基组分浓度成10倍或50倍的倍数关系，溶解时，每个组分应单

独溶解，溶解后按照氮、磷、钙、镁的顺序逐个混合，之后定容至500mL或1000mL。

5.2.4微量元素母液配制

微量元素母液各组分的浓度应与培养基组分浓度成200倍或500倍的倍数关系，溶解时，每个组分应

单独溶解，溶解后逐个混合，之后定容至1000mL，用棕色瓶，4℃保存。

5.2.5铁盐母液的配制

铁盐母液各组分的浓度应与培养基组分浓度成50倍或100倍的倍数关系，溶解时，每个组分应单独

溶解，溶解后再混合，之后定容至500mL或1000mL，静置24h后，4℃保存。

5.2.6维生素母液配制

维生素母液各组分的浓度应与培养基组分浓度成50倍或100倍的倍数关系，溶解时，每个组分应单

独溶解，溶解后再混合，之后定容至500mL或1000mL，4℃保存。

5.2.7激素母液配制

将植物生长调节剂按照0.5mg·mL-1或1.0mg·mL-1的浓度，按照配制后定容体积计算后称取所需质

量，用少量95%酒精、1mol·L-1氢氧化钠等溶液溶解后，用蒸馏水定容至所需体积，4℃保存。

5.3培养基制备

5.3.1启动培养、增殖培养以及生根培养培养基配方参见附录