GB/T 31791-2015 棉花曲叶病毒检疫鉴定方法

ICS65.020.01

B16

中华人民共和国国家标准

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GBT317912015

棉花曲叶病毒检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofCottonleacurlvirus

f

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2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

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GBT317912015

前言

本标准按照/—给出的规则起草。

GBT1.12009

。。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

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Ⅰ

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GBT317912015

棉花曲叶病毒检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了棉花曲叶病毒的免疫学及分子生物学检疫鉴定等方法。

本标准适用于可能携带棉花曲叶病毒的植物组织的检疫鉴定。

、

2仪器设备用具和试剂

2.1仪器设备

()、、、、、、

电子分析天平0.001g小型离心机台式冷冻离心机恒温水浴锅酶标仪普通PCR仪实时荧

、、、、、、、、

光PCR仪电泳系统pH计凝胶成像系统4℃冰箱超净工作台-80℃超低温冰箱高压灭菌锅

、、。

制冰机涡旋振荡器微波炉等

2.2用具

(、、、、)、、、(、

可调移液器2.5L10L20L100L1000L吸头离心管Eendorf管0.2mL

μμμμμpp

、)和研钵等。

0.5mL1.5mL

2.3试剂

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,。

除有特殊说明外所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂

、、附录及附录。

DAS-ELISA常规PCR及实时荧光PCR检测试剂分别见附录BCD

3检疫鉴定方法

3.1DAS-ELISA检测

DAS-ELISA检测见附录B。

3.2常规PCR检测

常规PCR检测见附录C。

3.3实时荧光PCR检测

实时荧光PCR检测见附录D。

4结果判断

、,。

及中两种不同原理的检测方法的结果为阳性即可判定样品为阳性一般是

3.13.23.3CLCuV

,

DAS-ELISA检测为阳性后常规PCR或实时荧光PCR检测结果为阳性即可判断样品为CLCuV

阳性。

1

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5样品保存与记录结果

5.1样品保存

,,。,。

结果判定为阳性的样品应妥善保存并做好登记和标记以备复核用保存期满后需经灭活处理

5.2结果记录

:、、、、、,

完整的实验记录要包括样品的来源种类时间实验检测时间地点方法和结果并有实验人员

;,,

的签字DAS-ELISA检测需有酶联反应原始数据PCR检测需有电泳结果图片实时荧光PCR检测需

有扩增曲线结果图片。

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附录

A

()

资料性附录

棉花曲叶病毒背景资料

A.1背景资料

A.1.1棉花曲叶病毒基本信息

:。

中文名棉花曲叶病毒

学名:。

Cottonleacurlvirus

f

缩写:。

CLCuV

:()()。

分类地位双生病毒科Geminiviridae菜豆金色花叶病毒属Beomovirus

g

:()传播及苗木嫁接传播。

传播途径烟粉虱Bemisiatabaci

A.1.2方法原理

,()

根据棉花曲叶病毒与抗体之间的特异性反应对样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附DAS-ELISA

;,

检测根据该病毒DNA保守区的特异性进行常规PCR或实时荧光PCR检测通过电泳条带大小或扩

增曲线的变化进行结果判定。

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A.2寄主范围

:()、()、(

该病毒可侵染的寄主有棉花Gossiumhirsutum烟草Nicotianatabacum秋葵Hibiscus

yp

esculentus)、番茄(Lcoersiconesculentum)、扶桑(Hibiscusrosasinensis)、苘麻(Abutilon

yp

)、()、()、()。

theohrasti芝麻Sesamumindicum矮牵牛Petuniahbrida曼陀罗Daturastramonium等

py

A.3分布

、、、、、。

该病毒现主要分布在巴基斯坦印度苏丹埃及尼日利亚马拉维和南非

A.4病害症状

,、,,,

棉花植株受侵染后早期表现新叶卷曲叶脉膨大后期在叶背面的主脉上形成耳突植株矮化结

实率下降或不结实。

A.5粒体形态

,。

棉花曲叶病毒具有典型的双联体颗粒形态大小为18nm×30nm~20nm×30nm

A.6基因组特征

,。