DB51/T 1907-2014 板栗疫病菌分子检测技术规范

ICS65.020.40

B61

DB51

四川省地方标准

DB51/T1907—2014

板栗疫病菌分子检测技术规范

2014-11-11发布2014-12-01实施

四川省质量技术监督局发布

DB51/T1907—2014

目次

前言...............................................................................II

1范围..............................................................................1

2规范性引用文件....................................................................1

3术语和定义........................................................................1

4原理..............................................................................2

5试剂和设备........................................................................2

6结果判定..........................................................................5

7结果表述..........................................................................5

8检测过程防止污染措施..............................................................5

9废弃物处理........................................................................5

附录A（资料性附录）板栗疫病基因组DNAPCR扩增结果.................................6

附录B（资料性附录）PCR产物序列....................................................7

I

DB51/T1907—2014

前言

本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的规定编写.

本标准由四川省林业厅提出并归口

本标准由四川省林业厅负责解释

本标准由四川省质量技术监督局批准

本标准起草单位：四川农业大学

本标准主要起草人：朱天辉、麻文建、李姝江、韩珊、谯天敏、张丽娜。

II

DB51/T1907—2014

板栗疫病菌分子检测技术规范

1范围

本标准规定了板栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica）的PCR检测技术的一般原则和技术要求。

本标准适用于四川省境板栗及山毛榉科植物枝干组织中板栗疫病菌的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB6682-2008分析实验室用水规格和实验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

SN/T1193基因检测实验室技术要求

SN/T2080-2008栎树猝死病菌检疫鉴定方法

SN/T2965-2011植物病原真菌分子生物学检测规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

3.1

板栗疫病Chestnutblight

板栗疫病又名板栗胴枯病、腐烂病、干枯病等，是板栗栽培区的主要病害，主要危害主、侧枝及主

干的树皮，严重时造成整个枝条或全株死亡。

3.2

板栗疫病菌Cyphonectriaparasitic

板栗疫病菌学名为[Cyphonectriaparasitic(Murr.)Barr]。隶属子囊菌亚门(Ascomycotina)，核菌纲

(Pyrenomycetes)，球壳菌目（Sphaeriales），间座壳科（Diaporthaceae）真菌。主要寄生于中国板栗、欧

洲板栗、锥栗、美洲板栗等山毛榉科植物。

3.3

聚合酶链式反应polymerasechainreaction,PCR

用于放大扩增特定的DNA片段的反应。在一定的温度条件下，将模板DNA的双链解开成单链，

在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则，以4种dNTP（deoxyribonucleosidetriphosphate,脱

氧核苷酸三磷酸）为底物，利用退火使引物得以延伸，一般经过30个左右的循环，DNA片段扩增倍数

就可达到106以上。

3.4

1

DB51/T1907—2014

双重PCRDuplexPCR

双重PCR是多重PCR的一种，指同一反应体系里加上两对引物，同时扩增两个核酸片段的反应。

3.5

扩增引物primer

人工合成的寡核苷酸，与模板DNA的一段序列上碱基互补配对，在PCR扩增中起到引导DNA扩

增的作用。

3.6

扩增模板template

用于DNA体外扩增的目标序列。

3.7