WS/T 684-2020 消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求

ICS11.080

C50

WS

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T684—2020

消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与

评价要求

Analyticalmethodandevaluationrequirementsforantibacterialdrugsindisinfectant

andantibacterialandbacteriostaticagents

2020-07-20发布2021-02-01实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

WS/T684—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、

北京市疾病预防控制中心、江苏省食品药品检验研究院、中国药科大学、国家食品安全风险评估中心、

山东省疾病预防控制中心、徐州市疾病预防控制中心、东南大学附属中大医院。

本标准主要起草人：徐燕、吴晓松、朱峰、胡小键、王嵬、李放、吉文亮、张流波、丁晓静、李舸

远、钱海、崔树玉、陈越英、沈瑾、李炎、赵云峰、陈达炜、苏冠民、常桂秋、褚宏亮、谈智、范晶晶、

孔庆芳、孙宏。

I

WS/T684—2020

消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求

1范围

本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求。

本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中四环素类（四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素）、

大环内酯类（红霉素）、β-内酰胺类（头孢拉定）、磺胺类（磺胺嘧啶）、喹诺酮类（氧氟沙星、诺氟

沙星）、林可酰胺类（克林霉素）、氯霉素类（氯霉素）及其它抗菌药物的测定和评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

中华人民共和国药典

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

抗菌药物antibacterialdrugs

具有抑菌和（或）杀菌活性、用于预防和治疗细菌性感染的药物，包括抗生素和按处方药管理的化

学合成药物。

4检测方法

4.1原理

试样中抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，提取液过滤后，与水混合，用超高效液相色谱-串联质谱

仪测定，内标法定量。

4.2试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为色谱纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。

4.2.1试剂

4.2.1.1乙腈（CH3CN）。

4.2.1.2甲酸（HCOOH）。

4.2.1.3甲醇（CH3OH）。

4.2.1.4氯化钠（NaCl）：分析纯。

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WS/T684—2020

4.2.2试剂配制

4.2.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸1.0mL，用水定容至1000mL，混匀。

4.2.2.2甲醇水溶液：取甲醇800mL，加水200mL，混匀。

4.2.3标准品

四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟

1315

沙星、克林霉素、氯霉素、四环素-D6、土霉素-C22-N2、米诺环素-D6、强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、

13

头孢氨苄-D5、左氧氟沙星-D8、红霉素-C-D3、噻菌灵-D4、氯霉素-D5，纯度均大于98.5%或经国家认

证并授予标准物质证书的标准物质，其他相关信息参见附录A。

4.2.4标准溶液配制

4.2.4.1标准储备液(约1.0mg/mL)：分别准确称取四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、

红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素约10.0mg于10mL容量瓶中，

用甲醇溶解并定至刻度，配成浓度约为1.0mg/mL的标准储备液，在-20℃±2˚C下冷冻保存，有效期为

3个月。

4.2.4.2混合标准中间液(10μg/mL)：分别准确吸取适量各单一标准储备液于25mL容量瓶中，用甲

醇稀释并定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准中间液，冷藏避光保存，有效期为1个月。

1315

4.2.4.3内标化合物标准储备液(约1.0mg/mL)：分别称取四环素-D6、土霉素-C22-N2、米诺环素-D6、

13

强力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-D5、左氧氟沙星-D8、红霉素-C-D3、噻菌灵-D4、氯霉素-D5约

10.0mg于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配成浓度约为1.0mg/mL的内标储备液，在-20℃

±2˚C下冷冻保存，有效期为6个月。

4.2.4.4混合内标化合物标准中间液：分别吸取适量单一内标储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释

并定容至刻度，配制成1μg/mL的混合内标中间液，冷藏避光保存，有效期为3个月。

4.2.4.5混合标准溶液：用甲醇水溶液将抗菌药物标准中间液配制成混合标准系列溶液，如1μg/L、2

μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L，各系列溶液中混合内标化合物浓度均为10μg/L，

超高效液相色谱-串联质谱仪测定。临用现配。

4.2.5材料

有机系滤膜：孔径为0.22μm。

4.3仪器和设备

4.3.1超高效液相色谱-串联质谱仪：带电喷雾离子源（ESI源）。

4.3.2分析天平：感量为0.1mg。

4.3.3离心机：转速≥9000r/min。

4.3.4涡旋混合器。

4.3.5超声波清洗器。

4.4分析步骤

4.4.1样品前处理

4.4.1.1液体剂型

2

WS/T684—2020

称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标

准中间液，再加3.0mL甲醇，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，加入0.15g氯化钠，涡旋混匀，

9000r/min离心5min，吸取上清液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，加入0.2mL水，混合均匀，

供超高效液相色谱-串联质谱测定。

4.4.1.2其它剂型

4.4.1.2.1凝胶剂型

称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标

准中间液，再加3.0mL乙腈，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，9000r/min离心5min，吸取上清

液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，再加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱

测定。

4.4.1.2.2膏霜剂型

称取0.2g（精确至1mg）混合均匀的样品，置于15mL离心管中，先加入10.0μL混合内标化合物标

准中间液，再加3.0mL甲醇，涡旋1min使样品分散，超声提取10min，9000r/min离心5min，吸取上清

液，滤膜过滤，取0.8mL滤液至进样瓶中，加入0.2mL水，混合均匀，供超高效液相色谱-串联质谱测

定。

4.4.2样品测定

4.4.2.1超高效液相色谱参考条件

超高效液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：C18柱（柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm），或相当者；

b)流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈；

c)流速：0.3mL/min；

d)柱温：40˚C；

e)进样体积：5μL；

f)梯度洗脱程序：见附录B。

4.4.2.2质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)电离方式：ESI+、ESI-同时扫描；

b)离子源温度：550℃；

c)毛细管电压：ESI+：5.5kV；ESI-：-4.5kV；

d)气帘气：2.1×105Pa；

e)雾化气：4.5×105Pa；

f)辅助气：4.5×105Pa；

g)监测模式：多反应监测（MRM）模式；

h)其它质谱参数：见附录C。

4.4.2.3标准曲线的制作

3

WS/T684—2020

将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，测得相应的峰面

积，以被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面积之比对相应的质量浓度做标准曲线，以离

子对定性，采用内标法进行定量分析，标准图谱参见附录D。

4.4.2.4定性测定

在相同测试条件下，试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变

化范围应在±2.5%之内，且检测到的相对离子丰度，应与浓度相当的标准溶液中相对离子丰度一致，

其相对丰度比偏差应符合表1要求。

表1相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%＞50＞20～≤50＞10～≤20≤10

允许的相对偏差/%±20±25±30±50

4.4.2.5定量测定

本方法采用内标法定量。纵坐标为被测组分定量离子峰面积与内标化合物定量离子峰面积之比（四

1315

环素、金霉素以四环素-D6为内标，土霉素以土霉素-C22-N2为内标，米诺环素以米诺环素-D6为内标，

13

强力霉素以强力霉素-D3为内标，红霉素以红霉素-C-D3为内标，头孢拉定以头孢氨苄-D5为内标，磺胺

嘧啶以磺胺嘧啶-D6为内标，氧氟沙星、诺氟沙星以左氧氟沙星-D8为内标、克林霉素以噻菌灵-D4为内

标，氯霉素以氯霉素-D5为内标），横坐标为样品中被测组分的质量浓度。

4.4.2.6测定

将试样溶液注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，以保留时间和两对离子（特征离子对/定量离子对）

所对应的色谱峰面积相对丰度进行定性，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。

4.4.3空白试验

除不加试样外，均按4.4.1步骤进行。

4.4.4结果计算和表述

试样中目标化合物的含量按式（1）计算：

ρV

X.................................................................................(1)

m

式中：

X——试样中被测组分的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；

ρ——试样溶液中被测组分按照内标法在标准曲线中对应的浓度，单位为微克每升（μg/L）；

V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；

m——样品称样量，单位为克（g）。

计算结果保留三位有效数字。

4.4.5精密度

4

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在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%，本方法的回收率

和精密度见附录E。

4.4.6检出限和定量限

当取样量为0.2g，提取液体积为3.0mL，本方法的检出限和定量限见附录F。

5其它抗菌药物的检测方法

可参照《中华人民共和国药典》方法进行检测。

《中华人民共和国药典》未涵盖的检测方法，可参考文献报道的方法，通过验证后方可应用。

6评价要求

6.1消毒剂与抗抑菌剂中不应添加抗菌药物。

6.2消毒剂与抗抑菌剂中四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素、红霉素、头孢拉定、磺胺

嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素的含量或总量均不应超过30mg/kg。

6.3消毒剂与抗抑菌剂中其他抗菌药物的含量或总量不应超过外用药物最小规格的1%。

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WS/T684—2020

CBAA

附录A

（资料性附录）

标准品相关信息

标准品相关信息见表A.1。

表A.1标准品相关信息

化合物英文名称分子式CAS编号化学结构式

四环素TetracyclineC22H24N2O860-54-8

土霉素OxytetracyclineC22H24N2O979-57-2

金霉素ChlorotetracyclineC22H23ClN2O857-62-5

米诺环素MinocyclineC23H27N3O710118-90-8

强力霉素DoxycyclineC22H24N2O8564-25-0

红霉素ErythromycinC37H67NO13114-07-8

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头孢拉定CephradineC16H19N3O4S38821-53-3

磺胺嘧啶SulfadiazineC10H10N4O2S68-35-9

氧氟沙星OfloxacinC18H20FN3O482419-36-1

诺氟沙星NorfloxacinC16H18FN3O370458-96-7

克林霉素ClindamycinC18H33ClN2O5S18323-44-9

氯霉素ChloramphenicolC11H12Cl2N2O556-75-7

四环素-D6Tetracycline-D6C22H18D6N2O8NA

131513151315

土霉素-C22-N2Oxytetracycline-C22-N2C22H24N2O9NA

7

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米诺环素-D6Minocycline-D6C23H27D6N3O31036070-10-6

强力霉素-D3Doxycycline--D3C22H21D3N2O8NANA

磺胺嘧啶-D6Sulfadiazine-D6C10H4D6N4O2SNANA

头孢氨苄-D5Cephalexin-D5C16H15ClD5N3O5SNA

左氧氟沙星-D8Levofloxacin-D8C18H12D8FN3O41217716-71-6

131313

红霉素-C-D3Erythromycin-C-D3C36CH64D3NO13959119-26-7

噻菌灵-D4Thiabendazole-D4C10H3D4N3S1190007-20-5

氯霉素-D5Chloramphenicol-D5C11H7Cl2D5N2O5202480-68-0

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DB

附录B

（规范性附录）

超高效液相色谱梯度洗脱程序

超高效液相色谱梯度洗脱程序见表B.1。

表B.1超高效液相色谱梯度洗脱程序

时间/min流动相A/%流动相B/%

0.0955

0.5955

2.08020

5.07030

6.51090

7.0595

7.5595

8.0955

8.5955

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EC

附录C

（规范性附录）

质谱参考条件

12种抗菌药物化合物和10种内标化合物的质谱参数见表C.1。

表C.112种抗菌药物化合物和10种内标化合物的质谱参数

检测物质母离子子离子保留时间/minDP电压/V碰撞能/eV

445.0410.0*27

四环素4.39120

445.015