DB32/T 3771-2020 渔业养殖用水中喹诺酮类抗生素测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.150

B51

DB32

江苏地方标准

DB32/T3771—2020

渔业养殖用水中喹诺酮类抗生素测定

液相色谱-串联质谱法

DeterminationofquinolonesinaquaculturewaterbyLC-MS/MS

2020-04-08发布2020-05-15实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3771—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由江苏省农业农村厅提出。

本标准由江苏省渔业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：江苏省淡水水产研究所、江苏省水产质量检测中心。

本标准主要起草人：孟勇、沈美芳、朱晓华、杨洪生、王静、张美琴、谭秀慧、刘崇万、王凯、朱

凛。

I

DB32/T3771—2020

渔业养殖用水中喹诺酮类抗生素测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了渔业养殖用水中16种喹诺酮类抗生素残留量的前处理和液相色谱-串联质谱测定方

法。

本标准适用于渔业养殖用水中恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、

依诺沙星、洛美沙星、萘啶酸、恶喹酸、氟甲喹、丹诺沙星、双氟沙星、奥比沙星、司帕沙星、氟罗沙

星16种抗生素残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其有效版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

水样用混合纤维素滤膜过滤后，喹诺酮类抗生素经固相萃取柱富集、洗脱和净化后，供液相色谱-

串联质谱仪测定，内标法定量。

4试剂和材料

4.1甲醇（CH3OH）。

4.2乙腈（CH3CN）。

4.3甲酸（HCOOH）。

4.4乙酸铵（CH3COONH4）。

4.5氨水（NH3·H2O）：优级纯。

4.65mmol/L乙酸铵缓冲液：称取0.1925g乙酸铵（4.4），溶于500mL水中。用甲酸（4.3）调节

pH为3±0.05。

4.75%氨水甲醇溶液：量取5mL氨水（4.5），用甲醇稀释并定容至100mL。

4.80.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸（4.3），用水稀释至1000mL。

4.90.1%甲酸水-乙腈：（9+1，体积比），量取90mL0.1%甲酸水溶液（4.8）和10mL乙腈（4.2）混

合。

4.10标准物质：恩诺沙星（Enrofloxacin）、诺氟沙星（Norfloxacin）、培氟沙星（Pefloxacin）、环

丙沙星（Ciprofloxacin）、氧氟沙星（Ofloxacin）、沙拉沙星（Sarafloxacin）、依诺沙星（Enoxacin）、

洛美沙星（Lomefloxacin）、萘啶酸（Nalidixicacid）、恶喹酸（Oxolinicacid）、氟甲喹（Flumequine）、

丹诺沙星（Danafloxacin）、双氟沙星（Difloxacin）、奥比沙星（Orbifloxacin）、司帕沙星（Sparfloxacin）、

氟罗沙星（Fleroxacin），纯度≥97.0%。

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DB32/TXXXX—2020

4.11内标物质：氘代诺氟沙星，氘代环丙沙星、氘代恩诺沙星，纯度≥97.0%。

4.12喹诺酮类标准储备溶液：分别称取适量喹诺酮类标准品（4.10），用甲醇(4.1)溶解并定容至10mL，

使各种喹诺酮的浓度均为1.0mg/mL。-18℃以下避光保存，有效期6个月。

4.13内标标准储备溶液：分别称取适量内标标准品（4.11），用甲醇(4.1)溶解并定容至10mL，使各

种内标浓度均为1.0mg/mL。-18℃以下避光保存，有效期6个月。

4.14混合标准中间溶液：分别量取适量标准储备溶液(4.12)于100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释配制

成浓度为1µg/mL的混合标准中间溶液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。

4.15混合标准工作溶液：根据需要用0.1%甲酸水-乙腈（4.9）由混合标准中间液（4.14）稀释成合适

的混合标准工作溶液，现配现用。

4.16混合内标标准工作溶液：分别量取适量标准储备溶液(4.13)于100mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释

配制成浓度为1µg/mL的混合内标标准工作溶液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。

注：除另有说明外，以下所用的试剂均为色谱纯，试验用水为GB/T6682规定的一级水。

5仪器和设备

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。

5.2天平：感量0.01g。

5.3分析天平：感量0.00001g。

5.4涡旋混合器。

5.5氮吹仪。

5.6pH计：测量精度±0.05。

5.7刻度玻璃离心管：10mL。

5.8混合纤维素滤膜：0.45µm。

5.9水系滤膜：0.22µm。

5.10固相萃取柱：HLB固相萃取柱：500mg，6mL，或性能相当者。

5.11固相萃取装置。

6样品制备与保存

采集的渔业养殖水样经0.45µm混合纤维素滤膜过滤。如水样较浑浊，可更换滤膜或过滤2次。过滤

后的水样于4℃密封保存，24h内进行检测。

——取过滤后的供试样品，作为供试试料。

——取过滤后的空白样品，作为空白试料。

——取过滤后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

7测定步骤

7.1提取和净化

依次用6mL甲醇，6mL超纯水，6mL5mmol/L乙酸铵缓冲液（4.6）活化小柱（5.10）。量取200mL

过滤后的试样，加入适量甲酸调节水样pH为3.0±0.05，准确加入1µg/mL混合内标标准工作液50µL

（4.16）。然后以约3~5mL/min流速通过固相萃取柱（5.10）。过柱后用6mL超纯水淋洗，再将小柱于

氮气保护下干燥20min，最后用6mL5%氨水甲醇溶液（4.7）分两次进行洗脱。洗脱液于40℃水浴用氮

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DB32/T3771—2020

气吹至近干，用0.1%甲酸水-乙腈（4.9）定容至1mL，涡旋混匀1min，过0.22µm水系滤膜，供液相色

谱-串联质谱仪测定。

7.2标准曲线的制备

精确量取适量混合标准中间溶液(4.14)和适量1µg/mL混合内标标准工作液（4.16），用0.1%甲酸

水-乙腈（4.9）配制成同位素内标浓度为50ng/mL以及16种喹诺酮浓度为1、5、10、20、50、100和

200ng/mL系列标准溶液。以被测组分和相应内标的峰面积比值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲

线，计算回归方程和相关系数。

7.3测定