DB15/T 2788-2022 向日葵根尖染色体制片和核型分析技术规程

ICS65.020.01

CCSB01

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2788—2022

向日葵根尖染色体制片和

核型分析技术规程

Technicalcodeofpracticeforchromosomepreparationandkaryotype

analysisofroottipofsunlower

2022-08-30发布2022-09-30实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2788—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。

本文件主要起草人：孙瑞芬、李素萍、于海峰、郭树春、张立华、孙峰成、乔慧蕾、聂惠、邵盈、

牟英男、韩平安、聂利珍、牛素清、常悦、唐宽刚、梁晨、吴家瑗。

I

DB15/T2788—2022

向日葵根尖染色体制片和核型分析技术规程

1范围

本文件规定了向日葵根尖染色体玻片标本制备的仪器和设备、试剂配制、制备方法及核型分析方法。

本文件适用于向日葵根尖染色体玻片标本制备和核型分析。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

染色体chromosome

细胞内具有遗传性质的遗传物质深度压缩形成的聚合体，一般呈棒状，因易被碱性染料染色，故称

染色体。

随体satellite

通过次缢痕与染色体主要部分相连，位于染色体末端的、圆形或椭圆形的染色体片段，称为随体。

具随体的染色体称为随体染色体，用sat表示。

核型karyotype

染色体组在有丝分裂中期的表型，包括染色体数目、大小、形态等特征。

核型分析karyotypeanalysis

利用染色体制片对体细胞分裂中期的染色体直接进行观察、计数、分组，并对每个染色体形态特征

进行定量和定性的描述，即为核型分析。

4仪器和设备

电子分析天平：精度0.001g。

冰箱。

1

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恒温培养箱。

光学显微镜(配有100倍油镜、成像系统)。

5试剂配制

0.002mol/L8-羟基喹啉

称取0.0145g8-羟基喹啉于蒸馏水中，60℃水浴溶解后定溶至500mL。

卡诺氏(Carnoy′s)固定液

无水乙醇：冰醋酸=3:1(体积比)，现用现配。

1mol/L盐酸

取比重1.19的盐酸82.5mL，用蒸馏水定溶至1000mL。

改良卡宝品红染液

A液：称取3g碱性品红，溶于100mL70%的乙醇，可以长期保存。

B液：取10mLA液加入90mL5%苯酚水溶液，在37℃条件下温育2h～4h(限14d内使用)。

卡宝品红染液：取B液45mL，加入6mL37%的甲醛，6mL冰乙酸，充分混匀(可长期保存)。

改良卡宝品红染液：取10mL卡宝品红染液，加入45%的冰乙酸90mL和1.8g山梨醇，室温下

放置14d后使用。

酶液

2%纤维素酶溶液：称取2g纤维素酶，加蒸馏水，定容至100mL。

0.5%果胶酶溶液：称取0.5g果胶酶，加蒸馏水，定容至100mL。

酶液：2%纤维素酶溶液和0.5%果胶酶溶液等量混合后，过滤除菌。

苏木精染液

甲液：称取1g苏木精溶于6mL无水乙醇中，即成苏木精-乙醇溶液。

乙液：称取10g铵矾溶于90mL蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液。

苏木精染液：取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使其充分氧化，3d～4d后

将溶液过滤，在滤液中加入25mL甘油和25mL甲醇，保存在密闭玻璃瓶内，静置30d～60d，待液体颜

色变深时过滤，可长久保存。

6染色体标本制备

常规压片法

6.1.1材料种植

挑选向日葵籽粒饱满、大小一致的种子，于温水中浸泡1h～2h后，均匀摆放在铺有3层浸润滤纸

的培养皿中，25℃培养箱中萌发。

6.1.2根尖切取与预处理

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当幼根长到1.5cm左右时，于上午9:30～10:00切取根尖，用0.002mol/L8-羟基喹啉处理5h。

6.1.3固定

将预处理后的根尖转入卡诺氏固定液中，常温条件下固定24h后转入70%乙醇中，4℃保存备用，

不超过60