DB41/T 1587-2018 饲料中大肠杆菌O157的检测 EMA-PCR法
DB41/T 1587-2018 DB41/T 1587-2018 Feed detection of Escherichia coli O157 using EMA-PCR method
基本信息
发布历史
-
2018年04月
研制信息
- 起草单位:
- 起草人:
- 出版信息:
- 页数:10页 | 字数:- | 开本: -
内容描述
ICS65.120
B46
DB41
河南省地方标准
DB41/T1587—2018
饲料中大肠杆菌O157的检测EMA-PCR法
2018-04-17发布2018-07-17实施
河南省质量技术监督局发布
DB41/T1587—2018
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由河南省畜牧局提出并归口。
本标准起草单位:河南省兽药饲料监察所、郑州大学。
本标准主要起草人:方忠意、高延玲、李金磊、赵全成、陈小鸽、孟伟、魏法山。
本标准参加起草人:董鹏、狄元冉、陈蔷、张艳娜、赵林萍、曾萍、张宁、王庆东、郑彬、李博、
彭丽、张磊。
I
DB41/T1587—2018
饲料中大肠杆菌O157的检测EMA-PCR法
1范围
本标准规定了饲料中大肠杆菌O157的EMA-PCR检测方法。
本标准适用于饲料中大肠杆菌O157的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB4789.6食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
3原理
叠氮溴化乙锭(EMA)能够透过死细菌的细胞膜,在强光照射下可与其DNA发生不可逆转的结合,使
死细菌DNA不能作为模板进行PCR扩增,而活菌能进行PCR扩增。
4试剂和材料
4.1除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂,试验用水符合GB/T6682一级水的要求。
4.2营养肉汤:见附录A的A.1。
4.3肠道增菌肉汤:见附录A的A.2。
4.42×PremixTaq缓冲液:内含TaqDNA聚合酶1.25U/25μL,4mmolMg2+,dNTP各0.4mmol。
4.5特异性引物(对)序列为:
a)上游引物:5'-CAGGTGAAGGTGGAATGGTTGT-3';
b)下游引物:5'-CTCTTTCCTCTGCGGTCCTAGTTA-3'。
4.6琼脂糖:电泳级。
4.7Marker2000。
4.8大肠杆菌O157CICC21530。
4.950×TAE缓冲液:见附录A的A.3。
4.106×上样缓冲液
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