GB/T 20196-2006 饲料中盐霉素的测定

ICS65.120

B20遏日

中华人民共和国国家标准

GB/T20196-2006

饲料中盐霉素的测定

Determinationofsalinomycininfeeds

2006-02-24发布2006-07-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T20196-2006

月U吕

本标准在查阅国内外文献基础上，提出饲料中盐霉素测定的两种方法。

第一法为微生物检验法(仲裁法)，微生物检验方法主要参考了我国原进出口商品检验局

SN0673-1997《出口肉及肉制品中盐霉素残留量检验方法滤纸片法》和日本厚生省199。年编写的

《畜、水产食品中的残留物质检验方法》中盐霉素残留量检测方法制定的。其方法原理、微生物检定操作

步骤基本相同，方法的范围、称样量、试样提取条件进行了改进，改进技术内容如下:

—一将提取液由甲醇，四氯化碳分离提取改为用甲醇和水直接提取;

—一由先过硅胶柱再过氧化铝层析柱净化改为直接用氧化铝层析柱净化。

第二法为高效液相色谱柱前衍生化法，参考J《ournalofChromatographyA))1999报导《高效液相色

谱柱前衍生化法测定动物饲料中拉沙里霉素、莫能霉素、盐霉素、甲基盐霉素》制定其方法原理、基本

操作步骤相同，方法的范围、试样称样量根据试验进行了改进，改进技术内容如下:

—一本标准范围适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料、盐霉素预混剂，较文献扩大;

—本标准称样量、盐霉素提取液稀释度见附录A

以上两种方法均增加了“重复性”。

本标准的附录B、附录C为规范性附录，附录A为资料性附录。

本标准由全国饲料标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(武汉)

本标准起草人:刘小敏、张勇、高利红、何一帆。

GB/T20196-2006

饲料中盐霉素的测定

范围

本标准规定了饲料中盐霉素的微生物检验方法和高效液相色谱仪柱前衍生化检验方法。

本标准两种方法均适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中盐霉素的测定。最低检出限为

1.25mg/kg。其微生物检验方法为仲裁法。本标准高效液相色谱柱前衍生化法也适用于盐霉素预混

剂中盐霉素的测定。

注1:1000盐霉素单位(U)相当干1mg的盐霉素《qzH,,O)

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单<不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T4789.1食品卫生微生物学检验总则

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

3方法1:微生物检验方法(仲裁法)

3.1原理

用甲醇和水提取试样中盐霉素，提取液过氧化铝层析柱净化，除去饲料中的千扰性物质洗脱液经

稀释(或浓缩)，利用试液中盐霉素与嗜热脂肪芽抱杆菌作用产生抑菌圈，根据抑菌圈大小用标准曲线法

定量测定盐霉素含量。

3.2试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水

3.2.1甲醇溶液

9+1(V+V)

3.22氧化铝

27。目一335目:经300℃活化3h，于干燥器冷却备用。

3.2.3氧化铝层析柱

将活化氧化铝装填人层析柱中(高20mm，内径10mm)，同时轻轻拍柱至氧化铝表面不再下降。

氧化铝的高度为8cm-9cm,

3.2.4试验菌种

嗜热脂肪芽抱杆菌(Bacillusstearothernzophilusvar.calidolactis),

3.2.5盐霉素标准溶液

3.2.5.1盐霉素标准贮备溶液

精确称取盐霉素钠标准品(含量94.100)0.1063g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，稀释至刻

度，摇匀，其浓度为1000pg/ml，置于。℃冰箱中，有效期两周。

3.2.5.2盐霉素标准中间液

准确移取10.00mL标准贮备液(3.2.5.1)于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，其浓度

分别为100.0,ug/m工。当日配制和使用

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GB/T20196-2006

3.2.5.3盐霉素标准工作溶液

分别准确移取一定量盐霉素中间液(3.2.5.2)，用甲醇溶液(3.2.1)稀释成浓度为5.00pg/mL,

10.00mp/9005..11pg/mI.,20.00p.g/mL,25.00jig/ml的标准工作液，其中5.00pg/mL为参考浓

度的标准工作液。以上溶液须当日配制和使用。

12.6培养基

按附录B中规定制备。

3.2.7菌悬浮液

嗜热脂肪芽抱杆菌接种于培养基工内，于(55士1)℃培养(17士1)h。于8000r/min离心15min,

弃去上层液。加人适量生理盐水，离心，反复洗涤，弃去洗液。最后加人30mL生理盐水制成均悬浮

液，于4℃冰箱保存，该溶液可使用6周一8周。

3.2.8检定平板的制备

在制平板前，先放上牛津杯注人0.10m工的5Ig/m工浓度的标准工作液(3.2.5.3)对菌悬液的最

佳用量进行预测试。以不同量的菌悬液加人经溶化并冷却至500C-55℃的培养基II，充分混合，于

(55士1)0C培养(17士llh后，选择能使该浓度标准工作液产生直径)12mm清晰、完整的抑菌圈的菌悬

液用量为最佳用量

于灭菌平皿中加人20ml熔化并冷却至500C-55℃的培养基且，保持水平，待其凝固后，制成基

层。再注入已加人最佳用量菌悬液的培养基II，保持水平，使其凝固制成检定平板，所用平板需当天

制备

3.3仪器与设备”

3.3.1高压灭菌锅或灭菌箱.

3.3.2恒温培养箱:55℃士10C,隔板保持水平

3.3.3旋转真空蒸发器。

3.3.4振荡器:往复式

3.3.5离心机:不低于7000g(9000r/min).

3.3.6游标卡尺:测量范围。mm-200mm，精度。.02mm;或抑菌圈测量仪。

3.3.7培养皿:内径90mm，底部平整光滑的玻璃皿，具陶瓦盖。

3.3.8牛津杯:内径6.0mm,高10.0mm，外径7.8mm的不锈钢管

3.3.9可调微量移液器:200浏一1000川。

注2:可调微量移液器需经过校准

3.3.10实验室常用玻璃器皿

3.4试样的制备

按G13/T14699.1饲料采样方法采样，选取饲料样品至少500g，四分法缩减至少100g，磨碎，通过

。28Vm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。

3.5分析步骤

3.5.1试液制备

3.5.1.1微生物实验室的操作注意事项按GB4789.1执行

3.5.1.2准确称取一定量试样，精确至。.0001g，于250m1具塞三角瓶中，准确加人20.0mL样品

提取液(3.2.1)，在往复振荡器上振荡1h，静置片刻，全部转移到准备好的氧化铝柱((3.2.3)中，用样品

提取液((3.2-1)不间断地洗脱。用100m1，容量瓶接收至刻度。

3.5.7.3根据提取液(3.5,1.2)中盐霉素预计浓度(依据标示量、称样量和提取液量确定分取量，参见

附录A)吸取一定量提取液((3.5.1.2)置于旋转蒸发器中，减压至干。加人适量