GB/T 20746-2006 牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、喹乙醇及代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T20746—2006

牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、唾乙醇

及代谢物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Methodforthedeterminationoftheresiduesofcarbadox,olaquindoxand

relatedmetabolitesinbovineandporcineliverandmuscletissues—

LC-MS-MSmethod

2006-12-31发布2007-03-01实施

发布

GB/T20746—2006

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刖a

本标准的附录A和附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。

本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人:庞国芳、谢丽琪、欧阳姗、蓝芳、林黎、涂小珂。

本标准系首次发布的国家标准。

T

GB/T20746—2006

牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、瞳乙醇

及代谢物残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

1范围

本标准规定了牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧及其代谢物脱氧卡巴氧、座噁咻-2-竣酸和唾乙醇代谢物

3-甲基座噁咻-2-竣酸残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛、猪肝脏和肌肉中K巴氧及其代谢物脱氧R巴氧、座噁咻-2-竣酸和座乙醇代谢物

3-甲基座噁咻-2-竣酸残留量的测定。

本标准的方法检出限：卡巴氧、脱氧卡巴氧、唾噁咻-2-竣酸和3-甲基座噁咻-2-竣酸均为0.5“g/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2；1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—1992,neqISO3696：1987)

3原理

用乙睛+乙酸乙酯(1+1)溶液提取肌肉和肝脏组织中的卡巴氧，提取液经正己烷脱脂后，旋转蒸发

至干，残渣用甲酸(0.1%)+甲醇(19+1)溶液溶解。样液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

用甲酸溶液消化试样，使组织中天然存在的酶失活，然后加入蛋白酶水解，盐酸酸化，离心过滤后，

过OasisMAX固相萃取柱或相当者净化。先用二氯甲烷洗脱脱氧卡巴氧，再用2%甲酸乙酸乙酯溶液

洗脱摩噁咻-2-竣酸和3-甲基座噁咻-2-竣酸，氮气吹干洗脱液，残渣用甲酸+甲醇(19+1)溶液溶解，样

液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2乙睛：色谱纯。

4.3甲酸：色谱纯。

4.4正己烷。

4.5乙酸。

4.6浓盐酸。

4.7乙酸钠。

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GB/T20746—2006

4.8二甲基甲酰胺。

4.9乙酸乙酯。

4.10中性氧化铝：200目〜300目。

4.11乙月青+乙酸乙酯溶液(1+1)。

4.12甲酸乙酸乙酯溶液：2%。向400mL乙酸乙酯中加入10mL甲酸，用乙酸乙酯定容至500mLo

4.13甲酸溶液：0.6%。量取6.0mL甲酸，用水溶解、定容至1L。

4.14甲酸溶液：0.1%。量取1.0mL甲酸，用水溶解、定容至1L。

4.15甲酸+甲醇溶液(19+1)。用190mL甲酸溶液(4.14)与10mL甲醇(4.1)混合。

4.16盐酸溶液：0.1mol/Lo量取&3mL浓盐酸，用水溶解、定容至1

4.17盐酸溶液：0.3mol/Lo量取25mL浓盐酸，用水溶解、定容至1L。

4.18Proteas蛋白酶:SigmaP5147或相当者，一18C以下保存。

4.19蛋白酶水溶液：0.01g/mLo称取1.00gProteas蛋白酶(4.18),用水溶解、定容至100mL,4°C

保存。

4.20乙酸溶液：10%。量取100mL甲酸，用水溶解、定容至1L。

4.21乙酸钠溶液：0.05mol/L,pH=70称取6.8g乙酸钠用800mL水溶解，再滴加10%乙酸溶液

以调节溶液pH=7,用水定容至1L。

4.22乙酸钠+甲醇溶液(19+1)。用190mL乙酸钠溶液(4.21)与10mL甲醇(4.I)混合。

4.23甲醇+水溶液(1+4)。

4.24Tris碱:SigmaT1503或相当者。

4.25Tris溶液：1.0mol/L。称取121gTris碱，用水溶解、定容至1L,4°C保存。

4.26卡巴氧、脱氧卡巴氧、唾噁咻-2-竣酸、3-甲基座噁咻-2-竣酸、座噁咻-2-竣酸P4标准物质：纯度

>99%.

4.27标准储备溶液：100mg/Lo准确称取适量标准物质，卡巴氧用二甲基甲酰胺溶解定容，其余标准

物质分别用甲醇溶解定容，配成100mg/L的标准储备液，在一18C保存，可使用1年。

4.28基质混合标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，用空白样品提取液配成不同浓度(Mg/L)的基

质混合标准工作溶液，在4€保存,可使用1周。

4.29内标丁作溶液：准确称取适量内标标准物质，用甲醇溶解定容，配成100Mg/L的标准T作溶液，

在4C保存,可使用1周。

4.30阴离子交换柱：OasisMAX60mg,3mL,或相当者。用前分别用3mL甲醇和3mL水活化，保

持柱体湿润。

4.31滤膜：0.2Mmo

5仪器

5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2固相萃取装置。

5.3氮气浓缩仪。

5.4液体混匀器。

5.5分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.6真空泵。

5.7均质器。

5.8移液器：10#L〜100卩L和100pL〜1000卩L。

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GB/T20746—2006

5.9聚丙烯离心管：5OmL,具塞。

5.10pH计:测量精度±0.02pH单位。

5.11低温离心机:可制冷到4C。

5.12玻璃离心管：15mL0

6试样制备与保存

6.1试样的制备

将牛、猪肝脏和肌肉组织样品充分搅碎，均质，分出0.5kg作为试样，置于清洁样品容器中，密封，

并做上标记。

6.2试样的保存

将制备好的试样于一18C以下保存。

7测定步骤

7.1卡巴氧的前处理步骤

7.1.1称取5g试样，精确至0.01go置于50mL聚丙烯离心管中，加入5g中性氧化铝（4.10）。

7.1.2加入25mL乙月青+乙酸乙酯溶液（4.11）,于液体混匀器上充分混合5min,以5000r/min离心

5min,将上清液移取至另一干净50mL离心管，加入10mL正己烷（4.4）到管内，振荡2min,以

5000r/min离心5min,弃去上层正己烷，将下层清液转移至150mL鸡心瓶中。

7.1.3重复7.1.2步骤一次，合并两次提取液于同一鸡心瓶中，加入一定量的唾噁麻-2-竣酸-d4标准

溶液（4.29），使其浓度为2.0ng/g,40"C水浴,减压旋转蒸发至干。

7.1.4准确加入1.0mL甲酸+甲醇溶液（4.15）溶解残渣，过0.2卩m滤膜后，供液相色谱-串联质谱

仪测定。

7.2脱氧卡巴氧、瞳卩恶咻-2-竣酸、3-甲基瞳卩恶咻-2-竣酸的前处理步骤

7.2.1称取5g试样，精确至0.01g。置于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL0.6%甲酸溶液

（4.13）,混匀后，置于（47±3）C振荡水浴中振摇1h；先加入3mL1.0