GB/T 20755-2006 畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050

X04

中华人民共和国国家标准

GB/T20755—2006

畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

Methodforthedeterminationofninepenicillinsresiduesin

livestorkandpoultrymuscles—

LC-MS-MSmethod

2006-12-31发布2007-03-01实施

发布

GB/T20755—2006

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本标准的附录A和附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。

本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。

本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。

本标准主要起草人:庞国芳、李学民、张进杰、曹彦忠、刘晓茂、范春林、刘永明、赵为。

本标准系首次发布的国家标准。

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GB/T20755—2006

畜禽肉中九种青霉素类药物残留量的测定

液相色谱■串联质谱法

1范围

本标准规定了牛、羊、猪和鸡肉中九种青霉素类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛、羊、猪和鸡肉中九种青霉素类药物残留量的测定。

本标准的方法检出限：荼夫西林为0.25/zg/kg,青霉素G为0.5Mg/kg,哌拉西林、青霉素V、苯瞠

西林为1.0pg/kg,阿莫西林、氨节西林、氯哇西林、双氯西林为2.0(ug/kg„

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义

(GB/T6379.1—2004,ISO5725-1：1994,IDT)

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分:确定标准测量方法重复

性与再现性的基本方法(GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT)

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—1992,neqISO3696：1987)

3原理

试样中青霉素类药物残留，用0.15mol/L磷酸二氢钠(pH=&5)缓冲溶液提取，经离心，上清液用

固相萃取柱净化，液相色谱一串联质谱仪测定,外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇:色谱纯。

4.2乙睛：色谱纯。

4.3磷酸二氢钠(NaH2P04)o

4.4氢氧化钠。

4.5乙酸。

4.6乙月青+水(1+1)：量取50mL乙月青(4.2)与50mL水混合。

4.7氢氧化钠溶液：5mol/L。称取20g氢氧化钠(4.4),用水溶解，定容至100mL。

4.磷酸二氢钠缓冲溶液：0.15mol/L0称取18.0g磷酸二氢钠(4.3),用水溶解，定容至1000mL,

然后用氢氧化钠溶液(4.7)调节至pH=&5。

4.9阿莫西林、氨节西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯醴西林、氯瞠西林、蔡夫西林、双氯西林九

种青霉素标准物质:纯度$99%。

4.10九种青霉素标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质(4.9),分别用水配制成浓度为

1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在一18C冰柜中。

4.11九种青霉素标准工作溶液：根据需要吸取适量的每种青霉素标准储备溶液(4.10),用空白样品提

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GB/T20755—2006

取液稀释成适当浓度的基质混合标准工作溶液。

4.12BUNDELUTC“固相萃取柱或相当者：5OOmg,6mLo使用前分别用5mL甲醇（4.1）.5mL

水和10mL磷酸二氢钠缓冲溶液（4.8）预处理，保持柱体湿润。

4.130.2滤膜。

5仪器

5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3振荡器。

5.4固相萃取真空装置。

5.5贮液器：50mL0

5.6微量注射器：25mL,1OOmLo

5.7刻度样品管：5mL,精度为0.1mL0

5.离心机:带有50mL具塞离心管。

5.9pH计:测量精度0.02pH单位。

6测定步骤

6.1试样溶液的制备

称取3g试样（精确到0.01g）置于离心机（5.8）中，加入25mL磷酸二氢钠缓冲溶液（4.8）,于振荡

器上振荡10min,然后，以4000r/min离心10min,把上层提取液移至下接BUNDELUTCia固相萃取

柱（4.12）的贮液器中，以3mL/min的流速通过固相萃取柱后，用2mL水洗柱，弃去全部流出液。用

3mL乙月青+水（4.6）洗脱，收集洗脱液于刻度样品管（5.7）中，用乙月青+水定容至3mL,摇匀后，过

0.2“ni滤膜（4.13）,供液相色谱-串联质谱仪测定。按照上述操作步骤制备空白样品提取液。

6.2测定

6.2.1液相色谱条件

a）色谱柱:SunFire™C1,3.5^m,150mmX2.1mm（内径）或相当者；

b）流动相梯度程序及流速见表1；

c）柱温：30"C；

d）进样量：20ptL0

表1流动相梯度程序及流速

时间/流速/水（含0.3%乙酸）/乙惰（含0.3%乙酸）/

min(卩L/min)(%)(%)

0.0020095.05.0

3.00zoo95.05.0

3.0120050.050.0

13.0020050.050.0

13.0120025.075.0

0020025.075.0

1&0120095.05.0

25.0020095.05.0

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GB/T20755—2006

6.2.2质谱条件

a）离子源：电喷雾离子源；

b）扫描方式：正离子扫描；

c）检测方式：多反应监测；

d）电喷雾电压：5500V；

e）雾化气压力；0.055MPa；

f）气帘气压力：0.079MPa；

g）辅助气流速：6L/min；

h）离子源温度：400”C；

i）定性离子对、定量离子对和去簇电压（DP）、聚焦电压（FP）、碰撞气能量（CE）及碰撞室出口电

压（CXP）见表2。

表2九种青霉素的定性离子对、定量离子对、去簇电压、聚焦电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压