DB34/T 3121-2018 Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测技术规程
DB34/T 3121-2018 PCR detection protocol for nucleic acid of group 4 avian adenovirus in serum
基本信息
发布历史
-
2018年04月
研制信息
- 起草单位:
- 阜阳市立华畜禽有限公司、阜阳市动物疫病预防与控制中心、阜阳市畜牧兽医局、 颍东区畜牧兽医局、阜阳市动物卫生监督所
- 起草人:
- 孟宪臣、张海涛、郭强、李东风、桑晓媛、高树朋、高永士、潘五岳、郑玉才、
- 出版信息:
- 页数:12页 | 字数:- | 开本: -
内容描述
ICS
11.220
B41
DB34
安徽省地方标准
DB34/T3121—2018
Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测
技术规程
TechnicalRegulationsofPCRAssayforDetectionofFowlAviadenovirusSerotype
4NucleicAcid
文稿版次选择
2018-04-16发布2018-05-16实施
安徽省质量技术监督局发布
DB34/T3121—2018
前
言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由阜阳市畜牧兽医局提出。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:阜阳市立华畜禽有限公司、阜阳市动物疫病预防与控制中心、阜阳市畜牧兽医局、
颍东区畜牧兽医局、阜阳市动物卫生监督所。
本标准主要起草人:孟宪臣、张海涛、郭强、李东风、桑晓媛、高树朋、高永士、潘五岳、郑玉才、
罗燕、刘新、薛亚梅、吴含萍、张娟娟。
I
DB34/T3121—2018
Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测技术规程
1范围
本标准规定了Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测技术。
本标准适用于对活禽肛拭子和病死禽肝脏进行Ⅰ群血清4型禽腺病毒的检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB19489实验室生物安全通用要求
GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法
3缩略语
以下缩略语适用于本文件。
FadV(FowlAviadenovirus):Ⅰ群禽腺病毒。
FAdV-4(FowlAdenovirus-4):Ⅰ群血清4型禽腺病毒。
PCR(PolymeraseChainReaction):聚合酶链式反应。
DNA(DeoxyribonucleicAcid):脱氧核糖核酸。
ExTaq酶:从水生栖热菌ThermusAquaticus(Taq)中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶,ExTaq
酶是其中的一种。
PBS(PhosphateBufferSolution):磷酸盐缓冲液。
SPF(SpecificPathogenFree):无特定病原。
4主要仪器
4.1高速台式冷冻离心机
4.2生物安全II级通风柜
4.3PCR扩增仪
4.4核酸电泳仪
4.5微量移液器(2μL、10μL、100μL、1000μL)
4.6超低温冰箱
4.7核酸凝胶成像系统
4.8高压蒸汽灭菌锅
4.9电热恒温鼓风干燥箱
4.10微量振荡器
1
DB34/T3121—2018
5主要试剂
5.1消化液(见第A.1章)
5.22%蛋白酶K溶液(见第A.2章)
5.3酚-三氯甲烷-异戊醇混合液(见第A.3章)
5.475%乙醇(见第A.4章)
5.5GoldView核酸染料
5.6上游引物P1:FAdV-4(10μM)
5.7下游引物P2:FAdV-4(10μM)
5.8琼脂糖(分析纯)
5.950×TAE缓冲液(见第A.5章)
5.10PBS(见第A.6章)
5.11DL2000DNAMarker(见第A.7章)
5.1210×LoadingBuffer(见第A.7章)
5.13双蒸水(符合GB/T6682要求)
5.14PCR用ExTaq(见第A.8章)
5.1510×ExTaqbuffer(Mg2+plus)(见第A.8章)
5.16dNTPMixture(见第A.8章)
6引物
根据GenBank登录的FAdV-4(GenBank:GU188428.1)Hexon基因核苷酸序列,设计用于扩增
FAdV-4的PCR引物,FAdV-4上游引物P1:FAdV-4(5'-GACCGTTACAAGTTTAGCATCTCC-3'),FAdV-4
下游引物P2:FAdV-4(5'-TCGCAGGAAGTCGTAGTGGA-3'),扩增核酸片段大小为951bp。
如果制备的核酸模板中有FAdV-4,PCR产物电泳后在951bp处出现条带,即
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