DB34/T 3121-2018 Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测技术规程

ICS

11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T3121—2018

Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测

技术规程

TechnicalRegulationsofPCRAssayforDetectionofFowlAviadenovirusSerotype

4NucleicAcid

文稿版次选择

2018-04-16发布2018-05-16实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T3121—2018

前

言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由阜阳市畜牧兽医局提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：阜阳市立华畜禽有限公司、阜阳市动物疫病预防与控制中心、阜阳市畜牧兽医局、

颍东区畜牧兽医局、阜阳市动物卫生监督所。

本标准主要起草人：孟宪臣、张海涛、郭强、李东风、桑晓媛、高树朋、高永士、潘五岳、郑玉才、

罗燕、刘新、薛亚梅、吴含萍、张娟娟。

I

DB34/T3121—2018

Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了Ⅰ群血清4型禽腺病毒核酸PCR检测技术。

本标准适用于对活禽肛拭子和病死禽肝脏进行Ⅰ群血清4型禽腺病毒的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T21674猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法

3缩略语

以下缩略语适用于本文件。

FadV（FowlAviadenovirus）：Ⅰ群禽腺病毒。

FAdV-4（FowlAdenovirus-4）：Ⅰ群血清4型禽腺病毒。

PCR（PolymeraseChainReaction）：聚合酶链式反应。

DNA（DeoxyribonucleicAcid）：脱氧核糖核酸。

ExTaq酶：从水生栖热菌ThermusAquaticus（Taq）中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶，ExTaq

酶是其中的一种。

PBS（PhosphateBufferSolution）：磷酸盐缓冲液。

SPF（SpecificPathogenFree）：无特定病原。

4主要仪器

4.1高速台式冷冻离心机

4.2生物安全II级通风柜

4.3PCR扩增仪

4.4核酸电泳仪

4.5微量移液器（2μL、10μL、100μL、1000μL）

4.6超低温冰箱

4.7核酸凝胶成像系统

4.8高压蒸汽灭菌锅

4.9电热恒温鼓风干燥箱

4.10微量振荡器

1

DB34/T3121—2018

5主要试剂

5.1消化液(见第A.1章)

5.22％蛋白酶K溶液（见第A.2章）

5.3酚-三氯甲烷-异戊醇混合液（见第A.3章）

5.475％乙醇（见第A.4章）

5.5GoldView核酸染料

5.6上游引物P1：FAdV-4（10μM）

5.7下游引物P2：FAdV-4（10μM）

5.8琼脂糖（分析纯）

5.950×TAE缓冲液（见第A.5章）

5.10PBS（见第A.6章）

5.11DL2000DNAMarker（见第A.7章）

5.1210×LoadingBuffer（见第A.7章）

5.13双蒸水（符合GB/T6682要求）

5.14PCR用ExTaq（见第A.8章）

5.1510×ExTaqbuffer(Mg2+plus)（见第A.8章）

5.16dNTPMixture（见第A.8章）

6引物

根据GenBank登录的FAdV-4(GenBank:GU188428.1)Hexon基因核苷酸序列，设计用于扩增

FAdV-4的PCR引物，FAdV-4上游引物P1：FAdV-4（5'-GACCGTTACAAGTTTAGCATCTCC-3'），FAdV-4

下游引物P2：FAdV-4（5'-TCGCAGGAAGTCGTAGTGGA-3'），扩增核酸片段大小为951bp。

如果制备的核酸模板中有FAdV-4，PCR产物电泳后在951bp处出现条带，即