GB/T 36389-2018 T4 DNA连接酶

ICS07.080

C27

国

中华人民共和国国家标准

GB/T36389-2018

T4DNA连接酶

T4DNAligase

2018-06-07发布2019-01-01实施

国家市场监督管理总局峪非

中国国家标准化管理委员会0(..'I(J

GB/T36389-2018

目u昌

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由全~丁－具酶标准化丁－作组（SAC/SWG11）归口。

本标准起草单位：福建南生科技有限公司、福建华灿制药有限公司、苏州海狸生物医学丁，程有限公

司、厦门致善生物科技股份有限公司、厦门大学、安琪酵母股份有限公司。

本标准主要起草人：郑登忠、詹学雄、黄发灿、任辉、赵品、章丽丽、宋如11杰、张永有、姚鹊。

I

GB/T36389-2018

附录C

（规范性附录）

核酸内切酶检测

C.1原理

pUC19质粒为环状结构，核酸内切陪能破坏环状结构，两者电泳谱带不一致。

C.2仪器

C.2.1电泳仪，备电泳槽。

C.2.2分析天平（万分之一）。

C.2.3紫外透光分析仪。

C.3实验步骤

C.3.1pUC19质粒反应

C.3.1.1在测试管里先后加入4µLpUC19质桂DNAOµg/µL）、14µL水、2µL陋，振荡器混匀，水浴

1ho

C.3.1.2在对照管里先后加入4µLpUC19质粒DNAO月／µL)、16µL水，振荡器混匀，水浴1h0

C.3.2电泳

1%～1.5%琼脂糖凝胶，电泳电压5V/cm~10V/cm，当澳酣蓝线到达凝胶版2/3时停止电泳，取

州凝胶板置于紫外透光分析仪观察和l拍照。

C.4结果判定

在电泳艇上，肉H良观察。若测试管和对照管的谱带一致，则判定样品中不含有内切酶；若不一致，则

判定样品中含有内切酶。

GB/T36389-2018

引

T4DNA连接酶来源于重组基因丁，程菌，催化相邻DNA链的5’－P末端和3’－OH末端以磷酸二醋

键结合的反应，促使蒙古性末端之｜可或平末端之间的连接。制订T4DNA连接酶同家标准，用以椎动该

类，丁具隅的产业化具有重要的意义。

II

GB/T36389-2018

T4DNA连接酶

1范围

本标准规定了T4DNA连接酶的技术要求、检盼方法、包装、运输、贮存和保质期。

本标准适用于从重组基因T程菌分离纯化的T4DNA连接隅。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件

。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T191包装储运罔示标志

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

YY/T0087电泳装置

YY/T0657医用离心机

3术语和定义

下列术语和l定义适用于本文件。

3.1

T4DNA连接酶T4DNAligase

一种核酸连接陋，能催化相邻DNA链的51-P末端和31-0H末端以磷酸二酣键结合的反应，促使

却性末端之间或平末端之间的连接。

3.2

T4DNA连接酶活性单位activityunitofT4DNAligase

在20p.L1×T4DNA连接酶反应缓冲液中，16℃反应条件下，30min能使50%的经HindIll消化

的＞..DNA片段［5＇端浓度为0.12p.mol/L(300p.g/mL）］连接所需的陪量定义为1个活性单位（U）。

4技术要求

4.1外观

澄清透明的液体，元沉淀。

4.2T4DNA连接酶活力

二到000U/mL。

4.3杂质