NY/T 684-2003 犬瘟热诊断技术

ICS11.220

841

中华人民共和国农业行业标准

NYJT684-2003

犬瘟热诊断技术

Diagnostictechniquesforcaninedistemper

2003-07-30发布2003-10-01实施

中华人民共和国农业部发布

NY/T684-2003

月吐青

本标准的附录A为规范性附录

本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。

本标准起草单位:农业部兽医诊断中心

本标准主要起草人:田克恭、王宏伟、遇秀玲、陈西钊、王传彬。

NY/T684-2003

犬瘟热诊断技术

1范围

本标准规定了犬瘟热(CD)的临床诊断、犬瘟热病毒(CDV)的分离与鉴定、免疫酶试验和免疫酶组

织化学方法等诊断技术

本标准适用于犬瘟热的诊断

2临床诊断要点

2.1临床症状

CD的临床表现多种多样，与CDV的毒力，环境条件，宿主的年龄、品种及免疫状态有关。病犬体

温升高至40℃以上，鼻流清涕至脓性鼻汁，脓性眼屎，有咳嗽、呼吸急促等肺炎症状，腹下可见米粒大丘

疹。病程长的犬足枕角质层增生。病后期CDV侵害大脑时则出现神经症状，头、颈、四肢抽搐。

2.2病理变化

CDV为泛嗜性病毒，对上皮细胞有特殊的亲和力，因此病变分布非常广泛。新生幼犬感染CDV通

常表现胸腺萎缩。成年犬多表现结膜炎、弃炎、气管支气管炎和卡他性肠炎。表现神经症状的犬通常可

见鼻和脚垫的皮肤角化病。中枢神经系统的大体病变包括脑膜充血，脑室扩张和因脑水肿所致的脑脊

液增加。

CDV的包涵体通常呈嗜酸性，位于胞浆内，直径1t}m-5km，可在粘膜上皮细胞、网状细胞、白细

胞、神经胶质细胞和神经元中发现。核内包涵体多位于被覆上皮细胞、腺上皮细胞和神经节细胞。

3病毒分离与鉴定

3.飞材料准备

3.1.1试剂

3.1.1.1改良最低要素营养液(DMEM)培养基，配方见第A.1章。

3.1.1.2非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)。

3.1.1.3标准阳性血清:CDV单克隆抗体，中和抗体效价1，1024.

3.1.1.4标准阴性血清:无CDV感染的犬血清。

3.1.1.5新生牛血清处理:用无血清DMEM洗涤细胞两次，加人培养液二分之一量的新生牛血清

37℃吸附1h。吸附后的新生牛血清分装，置一20℃备用

3.1.1.6青霉素、链霉素。

3.1.2器材

a)细胞培养瓶;

卜)吸管;

c)二氧化碳培养箱;

d)370C恒温水浴箱;

e)普通冰箱及低温冰箱;

f)离心机及离心管;

9)研磨器械;

h)普通光学显微镜;

NY/T684-2003

i)微量加样器，容量5,11^-50,11,50,1L-V200,1l;

j)0.45,1m微孔滤膜。

3.1.3样品

CDV存在于病犬心脏、肺脏、脾脏、胸腺、淋巴结等组织器官中。无菌采集这些器官用无血清

DMEM制成20%组