DB34/T 4268-2022 发酵茶中B族和G族黄曲霉毒素的测定

ICS67.140

CCSX55

34

安徽省地方标准

DB34/T4268—2022

发酵茶中B族和G族黄曲霉毒素的测定

DeterminationofaflatoxinBandGgroupsinfermentedtea

2022-08-31发布2022-09-30实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T4268—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由安徽农业大学提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽农业大学、安徽省茶业集团有限公司、肥西县农业综合服务中心、云南微生

物研究所。

本文件主要起草人：周育、管道健、张海柱、唐蜀昆、张梁、王希春。

I

DB34/T4268—2022

发酵茶中B族和G族黄曲霉毒素的测定

1范围

本文件规定了发酵茶中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G（以下简称2AFB1、

AFB2、AFG1和AFG2）的测定方法。

本文件第一法为双柱净化-高效液相色谱柱后光化学衍生法，适用于发酵茶中黄曲霉毒素AFB1、AFB2、

AFG1和AFG2含量的测定。

本文件第二法为双柱净化-液相色谱柱串联质谱法，适用于发酵茶中AFB1、AFB2、AFG1和AFG2含量的

测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4第一法双柱净化-高效液相色谱柱后光化学衍生法

原理

试样中的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液提取，提取液经多功能净化柱和免

疫亲和柱净化和富集，净化液经浓缩、定容和过滤后，经液相色谱分离，柱后光化学法衍生，荧光检测

器检测。外标法定量。

试剂及材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.2.1试剂

4.2.1.1甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱纯。

4.2.1.2乙腈（CH3CN，CAS：75-05-8）：色谱纯。

4.2.1.3氯化钠（NaCl，CAS：7647-14-5）。

4.2.1.4磷酸氢二钠（Na2HPO4，CAS：7558-79-4）。

4.2.1.5磷酸二氢钾（KH2PO4，CAS：7778-77-0）。

4.2.1.6氯化钾（KCl，CAS：7447-40-7）。

4.2.1.7盐酸（HCl，CAS：7647-01-0）。

1

DB34/T4268—2022

4.2.1.8吐温-20（C58H114O26，CAS：9005-64-5）。

4.2.1.9硫酸镁（MgSO4，CAS：7487-88-9）。

4.2.1.10聚乙烯基吡络烷酮（PVP，CAS：9003-39-8）。

4.2.1.11N-丙基乙二胺（PSA，CAS：111-39-7）。

4.2.2材料

4.2.2.1移液管：1mL和5mL规格。

4.2.2.2针筒式滤器：100mL规格，可连接于空气压力泵或手动加压。

4.2.2.3玻璃纤维滤纸：快速、高载量、液体中颗粒保留1.6μm。

4.2.2.4真菌毒素多功能净化柱（以下简称多功能净化柱）。

4.2.2.5免疫亲和柱：AFB1柱容量≥200ng，AFB1柱回收率≥80%，AFG2的交叉反应率≥80%。

4.2.2.6一次性针式过滤器：带0.22μm有机相微孔滤膜。

4.2.3试剂配制

4.2.3.1乙腈-水溶液（84+16）：取840mL乙腈加入160mL水，混匀。

4.2.3.2甲醇-水溶液（70+30）：取700mL甲醇加入300mL水，混匀。

4.2.3.3磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠、0.20g磷

酸二氢钾、0.20g氯化钾，用900mL水溶解，用盐酸调节pH至7.4，用去离子水定容至1000mL。

4.2.3.4含1%吐温-20的PBS：取10mL吐温-20，用PBS定容至1000mL。

4.2.4标准品

4.2.4.1AFB1标准品（C17H12O6，CAS：1162-65-8）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

4.2.4.2AFB2标准品（C17H14O6，CAS：7220-81-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

4.2.4.3AFG1标准品（C17H12O7，CAS：1165-39-5）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

4.2.4.4AFG2标准品（C17H14O7，CAS：7241-98-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

4.2.5标准溶液配制

4.2.5.1标准储备溶液

分别称取AFB1、AFB2、AFG1和AFG2各1mg（精确至0.01mg），用乙腈溶解并定容至100mL。各溶

液浓度为10μg/mL，溶液转移至试剂瓶中后，在-20℃下避光保存、备用，有效期三个月。临用前，

参照GB5009.22进行浓度校准。

4.2.5.2混合标准工作液（AFB1和AFG1：各100μg/L，AFB2和AFG2：各25μg/L)

移液管准确移取AFB1和AFG1标准储备溶液各1mL，AFB2和AFG2标准储备溶液各250μL至100mL

容量瓶中，乙腈定容。密封后避光-20℃下