GB/T 14551-2003 动、植物中六六六和滴滴涕测定的气相色谱法

GB/T14551-2003

前言

本标准是对GB/T14551-1993《生物质量六六六和滴滴涕的测定气相色谱法》进行下述内容

的修订:

—原标准中2.3制备色谱柱时使用的试剂、材料和3.6色谱柱及5.2.3校准数据表示的内容全

部删去;

—在第5章色谱测定操作步骤中增加了测定条件B、毛细管色谱柱及图谱;

—把6.2.2精密度、6.2.3准确度和6.2.4检测限的数据表格全部放到附录A中，原精密度用标

准偏差表示改为采用相对标准偏差表示

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。

本标准的起草单位:农业部环境保护科研监测所。

本标准的主要起草人:黄士忠、刘潇威、黄永春、王继军、买光熙、徐应明、李志祥、张克强。

GB/T14551-2003

动、植物中六六六和滴滴涕测定的

气相色谱法

1范围

本标准规定了动物(禽、畜、鱼、E酬)、植物(粮食、水果、蔬菜、茶、藕)中六六六、滴滴涕残留量的测

定方法。

本标准适用于动物性样品(禽、畜、鱼、蛆蝴)、植物性样品(粮食、水果、蔬菜、茶、藕)中有机抓农药残

留量的分析。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有

的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研

究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T17332-1998食品中有机氯和拟除虫菊醋类农药多残留的测定

NY/T397农、畜、水产品污染监测技术规范

3原理

动、植物样品中的六六六和滴滴涕农药残留量分析采用有机溶剂提取，经液一液分配及浓硫酸净化

或柱层析净化除去干扰物质，用电子捕获检测器(ECD)检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

4试荆与材料

4.1载气:氮气(NO，纯度)99.99%.

4.2标准样品及样品分析时使用的试剂和材料。所使用的试剂除另有规定外均系分析纯，水为蒸

馏水。

4.2.1农药标准品:

a-BHC丰-BHC,Y-BHC,8-BHC,P.P'-DDE,O.P'-DDT,P.P'-DDD,P.P'-DDT，纯度为98.0%-

99.0%.

4.2.1.1农药标准溶液的制备:准确称取农药标准样品每种100mg(准确到士。.0001g),溶于异辛烷

(汗BHC先用少量苯溶解)，在100mL容量瓶中定容至刻度，在冰箱中贮存。

4.2.1.2农药标准中间溶液的配制:分别准确量取八种农药标准溶液，移至100mL容量瓶中，用异辛

烷稀释至刻度，八种农药标准溶液的体积比为:V-oBHC:VPBHCIVtBHC'V&BHCIVP.，一。、，VO.P二，

VP.P'-DM，VP.P'-DDT=1，1，3.5，1，3.5，5，3，8,(适用于填充柱)

4.2.1.3农药标准工作液的配制:根据检测器的灵敏度及线性要求，用石油醚或正己烷稀释农药标准

中间溶液，配制成几种浓度的标准工作液，在4℃下贮存。

4.2.2正己烷(C6H14):沸程67'C-690C，重蒸。

4.2.3石油醚:沸程60'C-90'C，重蒸。

4.2.4异辛烷(C8H,.).

4.2.5丙酮(CH,COCH,)，重蒸。

4.2.6苯(CGHG):优级纯

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4.2.7浓硫酸(H2SO,):优级纯。

4.2.8发烟硫酸(H2SO,·XSO,)e

4.2.9高氯酸(HCIO,):优级纯。

4.2.10冰乙酸(CH,COOH):优级纯。

4.2.11无水硫酸钠(NagSO,):在300℃烘箱中烘烤4h，存放于干燥器中备用。

4.2.12硫酸钠溶液:20g/L,

4.2.13硅藻土:试剂级。

4.2.14助滤剂cCelite545.

4-2.15消解液:将60%高氯酸及冰乙酸等体积混合。

5仪器

5.1样品瓶，适宜的玻璃磨口瓶。

5.2旋转蒸发器。

5.3索氏提取器。

5.4水浴锅。

5.5振荡器。

5.6万能粉碎机。

5.7组织捣碎机

5.8真空泵。

5.9离心机。

5.10玻璃器皿:250mL,500mL分液漏斗，100,250,300mL具塞锥形瓶，500mL抽滤瓶，直径

5cm-9cm布氏漏斗，直径0.6cm-1.0cm，长20cm玻璃层析柱，50mL,100mL量筒，250mL平底

烧瓶，10m1_20mL刻度试管(经标定)，研钵。

5-11微量注射器。

5.12气相色谱仪带电子捕获检测器("Ni放射源)

6样品

6.1样品性状

6.1.1样品种类:动物性样品(禽、畜、鸟、兽、鱼、蛆蝴);植物性样品(粮食、水果、蔬菜、茶、藕)。

6.1.2样品的状态:固体。

6_1.3样品的稳定性，在各种样品中的六六六、滴滴涕化学性质稳定。

6.2样品的采集与制备

按照NY/T397规定采集。

6.2.1禽畜(包括鸟兽):家禽取1只~3只杀好的，从脊背切开，取其整体一半，去骨骼，然后捣碎，混

合，备用。家畜，根据测试目的，取其有代表性的样品。.5kg-1.0kg，捣碎，混匀，备用。

6.2.2鱼:去鳞、鳍、内脏，沿背脊纵剖后取其二分之一或数分之一5〔0g以下者取整体)，剔刺，用滤纸

吸干表面水，切碎，混匀，备用。

6.2.3贩闯:从田间采集贩闯20条一50条，在玻璃器皿中自然排泥2天(皿底垫滤纸加水湿润〕，然后

洗净，用滤纸吸干表面水，取20条切碎，混匀，备用。

6.2.4粮食:采取500g具代表性的(小麦、稻米、玉米等)样品，粉碎，过40目筛混匀，装人样品瓶

备用。

6.2.5果蔬、藕:取其代表性的果蔬、藕的可食部分1.0kg，切碎，取200.0g测水分含量，其余供实

验用。

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6.2.6茶叶:鲜样同6.2.5，干样同6.2.4,

6.3样品的保存

生物样品，采集后应尽快分析，如暂不分析可保存在一18℃冷冻箱中。

7分析步骤

7.1提取

7.1.1粮食

7.1.1.1A法:准确称取10.0g样品置于250mL具塞三角瓶中，加人60mL石油醚浸泡过夜，将上

清液转人250mL分液漏斗中，再用40mL石油醚分两次洗涤三角瓶及样品，合并洗涤液于分液漏斗

中，待净化。

7.1.1.2B法:准确称取10.0g样品置于250mL具塞三角瓶中，加人100mL石油醚，于电动振荡器

上振荡lh，提取液转移人250mL离心杯中(每次用20mL石油醚洗涤三角瓶后，倒人离心杯中离心

10min)，上清液合并于250mL分液漏斗中，待净化。

7.1.2果蔬、水生植物样(藕)

7.1.2.1A法:准确称取200.0g样品置于组织捣碎机缸内，快速捣碎1min^2min，称取匀浆

50.0g，置于250mL三角瓶中，加丙酮100mL，振摇1min,浸泡lh后过滤人500mL分液漏斗中，残

渣用30mL丙酮分三次洗涤，洗涤液合并于分液漏斗中，然后加人50mL石油醚，振摇1min，静置分层

后，将下层丙酮水溶液移人另一500mL分液漏斗中，用50mL石油醚再提取一次，用20mL石油醚洗

涤分液漏斗，并加人提取液中，然后加200mL硫酸钠溶液，振摇1min，静置分层，弃去下层丙酮水溶

液、石油醚提取液，待净化。

7.1.2.2B法:准确称取鲜样50.0g，加25g无水硫酸钠于组织捣碎机缸中，加人丙酮80mL，石油醚

20mI，快速捣碎2min，浆液经装有助滤剂545的布氏漏斗抽滤，然后用丙酮10X3ml一冲洗残渣直至

滤液近无色时止。滤液移人500mL分液漏斗中，加100mL硫酸钠溶液振摇1min，静置分层后，弃去

水层，待净化。

7.1.3茶叶样品

准确称取5.0g茶叶样，放人100mL具塞三角瓶中，加人22mI正己烷，3mL丙酮，振摇。.5h后

浸泡过夜，而后用装有玻璃纤维的漏斗过滤，下接25mL容量瓶，用正己烷定容，然后取5mL(相当于

1g茶叶样)，待净化。

7.1.4动物性样品

7.1.4.1A法(消解法):准确称取样品2.0g^5.0g,置于150mL具塞三角瓶中，加人消解液6〔0

HCIO;一冰乙酸(I，1,V/V}〕40mL，盖好玻璃塞，在室温下静置12h以上。然后在850C-90℃水浴中

热消解3h;待冷却后加人石油醚10mL，振摇2min,静置分层后用细嘴滴管将石油醚层移人250ml,

分液漏斗中。再以20mL石油醚分两次重复提取(最后一次在三角瓶中缓缓加人蒸馏水至瓶颈)。吸

尽石油醚浮层，合并三次提取液于分液漏斗中，待净化。

7.1.4.2B法(索氏提取法):准确称取均样2.0g-5.0g，加人10g-25g无水硫酸钠研成粉状，装人

滤纸筒内，放人索氏提取器中，用80mL石油醚浸泡过夜后，抽提4h-5h，每小时回流4次~6次，冷

却后将提取液转人100m工容量瓶中，在室温下用石油醚定容至刻度。

7.2净化

7.2.1A法(浓硫酸净化法):适用于土壤、粮食、果蔬、水生植物及动物肉类样品。在盛有石油醚提取

液的分液漏斗中，按提取液体积的十分之一数量加人浓硫酸，振摇1min，静置分层后，弃去硫酸层(注

意:用浓硫酸净化过程中，要防止发热爆炸，加浓硫酸后，开始要慢慢振摇，不断放气，然后较快振摇)，按

上述步骤重复数次，直至加人的石油醚提取液二相界面清晰时止，然后向石油醚提取液中加人其体积量

一半左右的硫酸钠溶液，振摇十余次，将其静置分层后弃去水层，如此重复至提取液呈中性时止(一般

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2次一4次)。石油醚提取液再经过装有2g-3g无水硫酸钠的筒型漏斗脱水，滤人250mL平底烧瓶

中，用旋转蒸发器浓缩至5mL，定容10mL，供气相色谱测定。

7.2.2B法(酸性硅藻土柱层析法):适用于茶叶、蛆蝴等小动物及动物内脏样品。取内径0.8cm-

1.0cm，长18cm-20cm干燥的层析柱，柱底端塞上玻璃棉。加约2cm厚的无水硫酸钠，再装人3g--

4g新调制的酸性硅藻土(10g硅藻土加3mL发烟硫酸，拌匀后，再加3ml-浓硫酸拌匀，即可)，上面再

装2cm厚无水硫酸钠，用橡皮锤子轻轻敲打柱子，使其松紧适度。取待净化的提取液于旋转蒸发器中

浓缩到1mL-2mL，倾人装好的层析柱中，承接适当规格的容量瓶收集淋洗液。待层析往中提取液液

面刚进人无水硫酸钠层后，用与提取液相同的溶剂10mL(石油醚或正己烷)反复淋洗层析柱，直到容量

瓶收集到定容10mL，供气相色谱测定。

7.2.3C法净化:遵照GB/T17332-1998中6.2的步骤进行，适用于粮食、水果、蔬菜样品，最后提取

液需浓缩至10ML,

7.3气相色谱测定

7.3.1测定条件A

7.3.1.1柱

a)玻璃桂:2.0mX2mm(i.d)，填装涂有1.5%OV一17+1.950oQF-1的ChromosorbWAW-

DMCS,80目一100目的担体。

b)玻璃柱:2.0mX2mm(i.d),填装涂有1.5%OV一17+1.95%OV一210的ChromosorbW

AW-DMCS-HP,80目~100目的担体。

7.3.1.2温度:柱箱195*C，汽化室2200C，检测器2600C-3000C,

7.3.1.3气体流速:氮气(Ni)50mL/min-70mL/min.

7.3.1.4检测器:电子捕获检测器(ECD)o

7.3.2测定条件B

7.3.2.1柱:石英弹性毛细管柱DB-17,30mX0.25G.d).

7.3.2.2温度:(柱温采用程序升温方式)

150'C些竺竺些竺二2800C塑醚竺二2800C，进样口2200C，检测器(ECD)3200C,

7.3.2.3气体流速:氮气1.0mL/min;尾吹37.25mL/min

7.3.3气相色谱中使用农药标准样品的条件

标准样品的进样体积与试样的进样体积相同，标准样品的响应值接近试样的响应值。当一个标样

连续注射进样两次，其峰高(或峰面积)相对偏差不大于7%，即认为仪器处于稳定状态。在实际测定时

标准样品与试样应尽可能同一时间内进行分析。

7.3.4进样

7.3.4.1进样方式:注射器进样

7.3.4.2进样量:1kL-4KLe

7.3.5色谱图

7.3.5.1色谱图

图1采用填充柱;图2采用毛细管柱。

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1—a-BHC;

2-7-BHC;

3-卜BHC;

4—8-BHC;

5-P.P'-DDE;

6-0.P'-DDT;

7-P.P'-DDD;

8-P.P'-DDT.

图1六六六、滴滴涕气相色谱图

.

，

4万跪万.﹄挂

跳若吸

肠目忿

.，

价1户寸

攀

0

1-a-BHC,

2—7-BHC;

3-汗BHC;

4—S-BHC,

5-P.P'-DDE;

6-O.P'-DDT;

7-P.P'-DDD;

8-P.P'-DDT.

图2六六六、滴滴涕气相色谱图

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7.3.5.2定性分析

7.3.5.2.1组分的出峰顺序:a-BHC,Y-BHC,3(-BHC,8-BHC,P.P'-DDE,O.P'-DDT,P.P'-DDD,

P.P'-DDT,

7.3.5.2.2检验可能存在的干扰，采用双柱定性。用1.5%OV-17+1.95%QF-1/chromosorbW

AW-DMCS,80目一100目色谱柱测定后，再用1.5%OV-17+1.95%OV-210/chromosorbWAW-

DMCS-HP,80目~100目色谱柱在相同条件下进行准确检验色谱分析，可确定各组分及有无干扰。

7.3.5.3定量分析

7.3.5.3.1气相色谱分析

吸取1KL棍合标准溶液注人气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高(或峰面积)。再吸取1HL

试样，注人气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高(或峰面积)，根据色谱峰的保留时间和峰高(或峰

面积)采用外标法定性和定量。

7.3.5.3.2计算

CXVXH,(S)XV

V;只H(SO沐m

式中:

X—样本中农药残留量，单位为毫克每千克(mg/kg);

C,;—标准溶液中i组分农药浓度，单位为微克每毫升(lg/mL);

V,,—标准溶液进样体积，单位为微升(pL);

V—样本溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);

V—样本溶液进样体积，单位为微升(川);

H;.(S.)—标准溶液中1组分农药的峰高(mm或峰面积mm');

Hi(Si)—样本溶液中I组分农药的峰高(mm或峰面积mm');

m—称样质量，单位为克(g).

8结果的表示

8.1定性结果

根据标准色谱图中各组分的保留时间来确定被测试样中六六六、滴滴涕各组分名称。

8.2定量结果

8.2.1含量的表示方法

根据7.3.3.3.2计算出的各组分含量，以mg/kg表示。

8.2.2精密度

变异系数(00):1.02%一12.73。参见表A.1~表A.6

8.2.3准确度

加标回收率(%):87.4%^-99.2%。参见表A.2.

8.2.4检测限

帚小检测浓度0.35X10-"me/k"--3.30X10-1mw/kg。参见表A.3

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附录A

(资料性附录)

方法的精密度、准确度和检测限

A.1方法的精密度见表A.1一表A.6.

表A.1玉米样精密度

变异系数%VDC/(允许差/(%)

农药名称添加浓度/(mg/kg)

室内室间室内室间

0.20004.12