GB/T 28062-2025 柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测技术规程

ICS6502001

CCSB.16.

中华人民共和国国家标准

GB/T28062—2025

代替GB/T28062—2011

柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测

技术规程

CodeofpracticefordetectionofCandidatusLiberibacterasiaticus

byquantitativereal-timePCR

2025-05-30发布2025-12-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T28062—2025

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件代替柑桔黄龙病菌实时荧光检测方法与

GB/T28062—2011《PCR》,GB/T28062—2011

相比除结构调整和编辑性改动外主要技术变化如下

,,:

更改了黄龙病样本的取样方法见年版的

———(9.1,20118.2);

更改了阳性对照的值规定见年版的

———Ct(11.3.2,201110.2.2);

将韧皮部杆菌亚洲种的荧光染料法检测引物更改成特异性更高的

———CQULasF04/CQULasR04

CLas-4G/HLBr(5'-AGTCGAGCGCGTATGCGAAT-3'/5'-GCGTTATCCCGTAGAAAAA

并增加了荧光标记探针序列为

GGTAG-3'),HLBp(5'-AGACGGGTGAGTAACGCG-3')

见年版的

(10.1,2011F.1.1);

增加了靶标韧皮部杆菌亚洲种核苷酸还原酶基因nrdB基因的实时荧光检测

———β()PCR

见

(11.3.3)。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本文件起草单位全国农业技术推广服务中心华南农业大学西南大学柑桔研究所

:、、。

本文件主要起草人冯晓东陈冉冉邓晓玲郑正王雪峰周常勇

:、、、、、。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为

:

年首次发布为

———2011GB/T28062—2011;

本次为第一次修订

———。

Ⅰ

GB/T28062—2025

柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测

技术规程

1范围

本文件确立了柑橘黄龙病病原韧皮部杆菌亚洲种Candidatus实时荧光定

(Liberibacterasiaticus)

量检测程序规定了实验室设置样品采集与处理检测操作方法和结果判定描述了证实方法

PCR,、、,。

本文件适用于对黄龙病寄主植物和传病媒介柑橘木虱中韧皮部杆菌亚洲种的实时荧光定量

PCR

检测和病害鉴定

。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

柑桔苗木产地检疫规程

GB5040

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

柑橘黄龙病CitrusHuanglongbing

由韧皮部杆菌Candidatus引起的植物检疫性病害对柑橘生产造成巨大损失

Liberibacterspp.,。

注韧皮部杆菌属原核生物α变形菌纲根瘤菌目根瘤菌科韧皮部杆菌属

:、-、(Rhizobiales)、(Rhizobiaceae),

是一种难培养革兰氏阴性细菌分为个种分布于亚洲非洲及美洲的韧皮部杆菌亚洲种Candi-

Liberibacter,,3:、

datus分布于非洲的韧皮部杆菌非洲种Candidatus以及分布于南

Liberibacterasiaticus;Liberibacterafricanus

美洲的韧皮部杆菌美洲种Candidatus

Liberibacteramericanus。

32

.

实时荧光定量PCRquantitativereal-timePCR

在体外扩增微量片段的方法在扩增过程中由于荧光物质的释放或荧光物质与扩增产物结

DNA,

合而释放荧光信号通过对荧光信号积累的实时监测来实现对起始模板中的靶标的定量分析

,DNA。

33

.

Ct值cyclethresholdvalue

实时荧光反应中每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数

PCR。

4方法原理

本文件采用的实时荧光定量检测包括了荧光染料法和荧光探针法两种检测方法荧光染料

PCR。

法是利用黄龙病菌特有序列设计引物在扩增时加入荧光染料荧光染料与扩增形成的产

DNA,PCR,

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