T/AHFIA 043-2019 白酒中α-亚麻酸和 L-苯基乳酸的测定 高 效液相色谱法

主要技术内容:主要条款：本标准的章节由范围、试剂与材料、主要仪器、测定步骤、结果计算、精密度以及检出限、方法不确定度组成。本标准中主要技术参数、试验验证参数如下：1、主要技术参数的确认1.1色谱柱的选择实验选取了两根不同型号的色谱柱，两种型号的色谱柱分别为HSS T3和BEH C18色谱柱，通过使用单因子变量法，最终确定BEH C18色谱柱分离较好，能够将α-亚麻酸和L-苯基乳酸完全分离。色谱图如图1所示图1所示为：标准样品的色谱图1.2 流动相的选择实验对流动相的选择首先选定水-甲醇、乙酸-甲醇，水-乙腈，甲醇-磷酸等进行实验，通过实验后，均发现效果较差，不能够很好的实现分离。发现使用低浓度的磷酸对两种物质的分离会起到很大的作用，配制1%、0.5%以及0.1%的磷酸溶液作为流动相分别进行实验，实验结果表明，使用0.1%的磷酸分离较好，而且峰形较好，满足使用要求，故实验选择0.1%的磷酸作为流动相进行α-亚麻酸和L-苯基乳酸的分离。1.3 波长的选择通过查找文献并进行试验， 实验阶段对本次实验进行了系统归纳与总结，通过使用210-500nm的波长段扫描，得到相应的3D扫描图，经过后期的提取色谱图和文献报道，确定最佳检测波长205nm。标样验证进行相应的波长验证。2、试验验证各项技术参数确定后，标准制定小组通过精密度、重现性、稳定性和回收率试验验证效果，获得的平行测定结果的相对标准偏差RSD%均小于5，其精密度符合方法学的要求；并进行了异地验证试验及方法不确定度的计算，提高了本方法规范性、统一性和科学性。2.1标准曲线的建立准确吸取α-亚麻酸和L-苯基乳酸混合标准溶液，分别配制5个浓度的溶液（α-亚麻酸标准曲线浓度：20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、400mg/L；L-苯基乳酸标准曲线浓度：25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L）。测定5个浓度的标准混合工作液，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；R2=0.998，线性良好。2.2精密度对同一白酒样品，按照样品制备方法平行制备6份样品，并用本方法进行α-亚麻酸和L-苯基乳酸检测（其中一个样品重复进样6次），所得重复性和重现性检测结果如表1和表2所示表1 α-亚麻酸和L-苯基乳酸重复性检测结果项目 次数123456RSDL-苯基乳酸