GB/T 26635-2025 动植物油脂 生育酚及生育三烯酚含量测定 高效液相色谱法

ICS6720010

CCSX.14.

中华人民共和国国家标准

GB/T26635—2025/ISO99362016

:

代替GB/T26635—2011

动植物油脂生育酚及生育三烯酚

含量测定高效液相色谱法

Animalandvegetablefatsandoils—Determinationoftocopheroland

tocotrienolcontents—High-performanceliquidchromatography

ISO99362016Animalandveetablefatsandoils—Determinationof

(:,g

tocopherolandtocotrienolcontentsbyhigh-performanceliquid

chromatorahIDT

gpy,)

2025-12-31发布2026-07-01实施

国家市场监督管理总局发布

国家标准化管理委员会

GB/T26635—2025/ISO99362016

:

前言

本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

本文件代替动植物油脂生育酚及生育三烯酚含量测定高效液相色谱

GB/T26635—2011《

法与相比除结构调整和编辑性改动外主要技术变化如下

》,GB/T26635—2011,,:

更改了范围见第章年版的第章

———(1,20111);

更改了流动相见年版的

———(5.4,20115.4);

将试剂中正己烷更改为正庚烷见年版的

———(9.2.1,20119.2.1)。

本文件等同采用动植物油脂高效液相色谱法测定生育酚及生育三烯酚含

ISO9936:2016《

量

》。

本文件做了下列最小限度的编辑性改动

:

为与现有标准协调将标准名称改为动植物油脂生育酚及生育三烯酚含量测定高效液相

———,《

色谱法

》;

将中的段改为按顺序列项以方便阅读使用

———6.1,。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任

。。

本文件由国家粮食和物资储备局提出

。

本文件由全国粮油标准化技术委员会归口

(SAC/TC270)。

本文件起草单位中粮工科西安国际工程有限公司河南华测检测技术有限公司中储粮质检中

:()、、

心有限公司陕西联同通用标准技术服务有限公司贵州省林业调查规划院陕西海斯夫生物工程有限

、、、

公司国贸食品科学研究院有限公司贵阳学院国家粮食和物资储备局科学研究院武汉轻工大学江

、、、、、

南大学河南工业大学重庆酉州油茶科技有限公司陕西省粮油科学研究院中粮工科检测认证有限

、、、、

公司

。

本文件主要起草人任春明李俊超秦学磊单晓雪杨红梅顾艳文常云鹤李姝温煜韦汉渝

:、、、、、、、、、、

孟永宏刘佳苗雨田陈修红薛雅琳段章群何东平张四红王兴国刘玉兰周万猛刘梁

、,,、、、、、、、、、

侯俊财冯红霞姜友军罗世龙蒋敏樊艳妮龚珊王苹杨青博

,、、、、、、、。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为

:

年首次发布为

———2011GB/T26635—2011;

本次为第一次修订

———。

Ⅰ

GB/T26635—2025/ISO99362016

:

动植物油脂生育酚及生育三烯酚

含量测定高效液相色谱法

1范围

本文件描述了用高效液相色谱测定动植物油脂中游离α-β-γ-δ-生育酚及生育三烯酚含

(HPLC)、、、

量的方法

。

本文件适用于动植物油脂中生育酚及生育三烯酚含量的测定对于含有生育酚酯及生育三烯酚酯

,

的产品先对其进行皂化处理

,。

本文件不适用于牛奶及奶制品含来源于牛奶及奶制品的脂肪

()。

注在附录中描述了低温皂化的适宜方法

:B。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文

。,

件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于

,;,()

本文件

。

动植物油脂试样的制备

ISO661(Animalandvegetablefatsandoils—Preparationoftestsam-

ple)

注动植物油脂试样的制备

:GB/T15687—2008(ISO661:2003,IDT)

3术语和定义

31

.

生育酚含量tocolcontent

使用本文件规定的方法测定的单体生育酚的质量分数

。

注含量以毫克每千克表示为整数

:。

4原理

将测试样品溶解在正庚烷中通过高效液相色谱将各单体进行分离用标准溶液测定的校正系数计

,,

算生育酚和生育三烯酚的含量

。

5试剂

所用试剂均为色谱级或相同等级

。

51α-β-γ-及δ生育酚和生育三烯酚标准物质

.、、-。

无生育酚标准物质时用小麦胚芽油和大豆油的混合物来确认α--γ-及δ-生育酚

,、β、。

无生育三烯酚标准物质时可用棕榈油来确认α-和γ生育三烯酚获得的色谱图能用来辅助识别

,-,

测试样品色谱图的峰在这种情况下宜使用相应生育酚的校准系数

,,。

1

GB/T26635—2025/ISO99362016

:

注α-β-γ-及δ生育酚和生育三烯酚标准物质能从1)公司获取α生育酚能从多家供应商处获得生育三

:、、-Merck。-。

烯酚标准品能从2)公司获得据报道一些市售生育酚标准品的纯度在之间因此

SigmaAldrich。,85%~100%。

有必要用紫外分光光度计测定所配标准溶液的浓度见

(9.1.1)。

52四氢呋喃用尼龙过滤器过滤

.:HPLC(0.45μm)。

53正庚烷用尼龙过滤器过滤

.:HPLC(0.45μm)。

54高效液相色谱流动相

.。

任何已被证明能达到表生育酚和生育三烯酚的相对保留时间和附录植物油混合物色谱中

2()A()

所示色谱分离峰分辨率的溶剂混合物宜被使用见附录的表

(CC.3)。

通过使用以体积分数叔丁基甲基醚体积分数正庚烷的混合物和二醇基柱能实现

5%()+95%(),

γ-生育酚和β生育三烯酚的良好分离

-。

准备合适的流动相体积分数的四氢呋喃正庚烷溶液的制备方法如下用量筒

,3.85%():1000mL

量取正庚烷置于瓶中用移液管添加两次四氢呋哺

(6.5)1000mL(5.3)2L,20mL(6.6)20mL

用超声波发生器将流动相混匀均质

(5.2),(6.8)15min。

55甲醇

.。

6仪器

除常用试验仪器外还包含以下仪器

,。

61高效液相色谱系统组成如下

.:

高压泵

———;

进样器

———;

柱温箱柱温可调在可选

———,25℃();

荧光检测器具有激发波长和的发射波长

———,295nm330mm;

数据处理系统

———。

宜使用荧光检测器若无荧光检测器也可使用紫外检测器如果使用紫外检测器波长应设置为

。,。,

292nm。

62高效液相色谱分析柱

.。

填充平均粒径约为的二醇微粒或填充平均粒径约为

250mm×4mm,5μm250mm×4.6mm,

的二氧化硅微粒

5μm。

注1市售的合适的二醇基硅胶柱的填料是粒径的市售的合适的硅胶柱的填料是

:5μmLiChrospher100Diol,5μm

粒径的和3)当样品中含有β生育三烯酚时优先使用二醇基硅胶柱因为使

LiChrosobSI60Kromasil100。-,,

用硅胶柱时γ-生育酚和β生育三烯酚会被同时洗脱

-。

注2柱的长度和直径能根据实验条件做相应选择

:。

注3两种类型的柱子已经做了精度数据的评估见附录

:(C)。

公司生产的生育酚标准品可从公司购买每瓶包装含

1)Merk(set613424)Calbiochern()。

的α生育酚dβ生育酚dγ生育酚和dδ生育酚每种成分纯度为公司生

50mgDL--、--,----(),HPLC95%。Merk

产的生育三烯酚标准品也可从公司购买每瓶包装含的α-β-γ-及δ生育三烯

(set613432)Calbiochem,50mg、、-

酚纯度为γ生育三烯酚为给出这一信息是为了方便本文件使用者并不表示对该产品

,HPLC95%(-75%)。,

的认可如果其他产品具有相同的效果那么可使用这些等效产品

。,。

生育三烯酚可从和购买纯度在

2)SigmaAldrich()Chromadex(),

之间给出这一信息是为了方便本文件使用者并不表示对该产品的认可如果其他产品具有相

65%~98%。,。

同的效果那么可使用这些等效产品

,。

以上色谱柱是适合的市售产品的实例给出这一信息是为了方便本文件使用者并不表示对这些产品的认可

3)。,。

如果其他产品具有相同的效果那么可使用这些等效产品

,。

2

GB/T26635—2025/ISO99362016

:

63紫外分光光度计能在精确波长处准确测定带比色皿

.:,10mm。

64旋转蒸发器

.。

65量筒

.:1000mL。

66移液管和

.:5mL、10mL20mL。

67容量瓶和

.:50mL25mL。

68超声波发生器

.。

7扦样

所取样品宜具有代表性在运输储藏过程中不应受损或变质

。。

扦样不是本文件规定的内容宜采用中的采样方法

,ISO5555。

8样品制备

样品为液体时按所述方法通过均质化制备测试样品但宜避免过滤

,ISO661,。

样品为固体时取具有代表性物质不少于样品的于烧杯中在不超过的水浴中融

,(10%),40℃

化并轻微振荡混匀

,。

样品制备宜在可行条件下于柔光下进行且在所有情况下都要避开阳光直射

,。

9操作步骤

重要提示在分析过程中生育酚的氧化可能导致试验结果偏低氧化速度随着碱热和光的影响而

:,、

增加检测时宜避免这些因素的影响

,。

91标准溶液的制备

.

911标准储备液

..

称量标准物质于容量瓶中用正庚烷稀释至刻度制备每种

10mg±1mg(5.1)50mL(6.7),(5.3),

生育酚的标准储备液

。

用移液管吸取储备液至棕色玻璃圆底烧瓶中在温度不超过真空条件下用旋转

(6.6)5mL,40℃,

蒸发器除去正庚烷立即通入氮气消除真空并取下圆底烧瓶用移液管向烧瓶中注入甲

(6.4)。。10mL

醇振荡溶解残余物用带比色皿的紫外分光光度计在之间选择适

(5.5),10mm(6.3),270nm~310nm

当的波长见表测吸光度测得的吸光度宜在之间用吸光度除以表中相应的校正系数计

(1),0.2~0.8,1

算浓度用毫克每毫升表示

[(mg/mL)]。

表1校正系数

波长生育酚校正系数

/nm