DB15/T 2727-2022 牛冠状病毒腹泻诊断技术规范

ICS65.020.30

CCSB41

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T2727—2022

牛冠状病毒腹泻诊断技术规范

Technicalspecificationfordiagnosisofbovinecoronavirusdiarrhea

2022-07-29发布2022-08-29实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T2727—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区动物疫病预防控制中心、中国农业科学院哈尔滨

兽医研究所、金宇保灵生物药品有限公司、通辽市农业技术推广中心。

本文件主要起草人：徐晓静、谢梦圆、王建龙、常继涛、马立峰、郭宇、黄海碧、陈坚、刘景龙。

I

DB15/T2727—2022

牛冠状病毒腹泻诊断技术规范

1范围

本文件规定了牛冠状病毒腹泻的临床诊断和实验室诊断技术方法、操作程序和判定标准。

本文件适用于奶牛饲养场（户）、肉牛饲养场（户）和动物诊疗单位对牛冠状病毒腹泻的检测、诊

断和检疫等。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BCoV：牛冠状病毒（Bovinecoronavirus）

CPE：致细胞病变效应（CytopathicEffect）

DMEM：最低营养需要培养基（DuLbecco’sModifiedEagleMedium）

FBS：胎牛血清（FetalBovineSerum

HRT-18细胞：人直肠肿瘤18细胞（HumanRectaltumor-18cell）

PBS：磷酸盐缓冲盐水（PhosphateBufferSaline）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

TCID50：半数组织培养物感染量（MedianTissueCultureInfectiveDose）

5生物安全措施

样品处理的生物安全措施符合GB19489的规定。

样品采集的生物安全措施符合GB/T27401的规定。

6病原

1

DB15/T2727—2022

牛冠状病毒属冠状病毒科，乙型冠状病毒属，病毒颗粒为球状，直径通常在80nm～120nm，具有

囊膜和棒状纤突，核衣壳螺旋状对称。基因组为单股正链RNA。

7临床诊断

流行病学

7.1.1易感动物

7日龄的犊牛易感，其他日龄犊牛及成年牛也可感染。

7.1.2传染源

病牛是本病自然流行的主要传染源，犊牛一旦感染，可排出大量病毒粒子。

7.1.3传播途径

经消化道、呼吸道及接触传播。

7.1.4流行特点

冬春季节多发，腹泻通常在同一牛场连续发生。

临床症状

犊牛感染后发生腹泻，发病初期出现带血的黄色黏性粪便，后期发展为水泻，有时出现脱水、虚弱、

体温低，少数犊牛出现发热、卧地不起等症状，严重的犊牛会出现昏迷甚至死亡。成年牛常突然暴发，

排出深褐色带血稀粪，伴有产奶下降、沉郁及厌食等症状。

病理变化

小肠肠壁变薄、透明，肠腔液体增多，严重者引起腹腔积水，胃内有未消化的凝乳块。感染的牛可

能伴随呼吸道症状，表现为气管黏膜充血、局限性肺炎等。

结果判定

符合6.1、6.2、6.3，可判定为牛冠状病毒腹泻疑似病例。

8实验室诊断

主要仪器设备

电镜、低温高速离心机、倒置显微镜、T25细胞培养瓶、CO2细胞培养箱、96孔细胞培养板、PCR仪、

PCR管、电泳仪、凝胶成像仪、酶标仪。

主要试剂

PBS、2%磷钨酸、DMEM培养基、细胞培养液、细胞维持液、胰酶、HRT-18细胞、PCRTaq酶、DNAMar